利用微滴数字PCR方法快速分析转基因玉米中外源基因的拷贝数

姜志军,　江　颖,　徐摇光,　张立全,　张晓东*

1.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心, 北京 100097;2.首都师范大学生命科学学院, 北京 100037



利用微滴数字PCR方法快速分析转基因玉米中外源基因的拷贝数

姜志军1,2,江颖1,徐摇光1,张立全1,张晓东1,2*

1.北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心, 北京 100097;2.首都师范大学生命科学学院, 北京 100037

以玉米自交系501幼胚为受体材料，首先将来自球形节杆菌的EPSPS基因(G23V)按玉米密码子偏爱性进行优化与人工合成，并且将其克隆到表达载体pBAC9200中；然后利用农杆菌介导法将质粒载体转入玉米自交系501的幼胚中。经过愈伤诱导、草甘膦抗性筛选和分化培养最终获得14株转化再生植株。经PCR、RT-PCR检测表明，其中5株目的基因G23V-EPSPS稳定整合且在转录水平获得表达。随后，利用微滴数字PCR技术对外源基因拷贝数进行了检测分析，分析结果表明在5株阳性转基因植株中，外源基因G23V-EPSPS拷贝数分别为0.12、1.0、0.9、1.89和0.66，介于0～2之间。成功建立了草甘膦抗性基因G23V-EPSPS在玉米中的遗传转化体系，为以新型高抗草甘膦G23V-EPSPS基因作为转基因玉米筛选标记基因奠定了基础；而且以微滴数字PCR技术代替传统的Southern Blot简便快速的完成外源基因拷贝数的分析，为微滴数字PCR技术在转基因外源基因拷贝数检测上的广泛应用做了初步的探索。

转基因玉米；G23V-EPSPS基因；抗草甘膦；ddPCR

玉米(ZeamaysL.)是世界三大粮食作物之一，在农业、畜牧业和工业中占据重要地位，全球对玉米的需求量正在不断攀升。近年来，玉米作为转基因技术主要的研究对象受到世界各国科学家的广泛关注。……