Ⅱ型胶原糖胺聚糖复合支架对hUCMSCs成软骨诱导的实验研究*

蔡第心，何鹏举，谭洪波，丁　晶，余开富，张　颖，周田华，杨　军，徐永清△

(1.昆明医科大学骨科，昆明 650000；2.成都军区昆明总医院骨科,昆明 650000)



Ⅱ型胶原糖胺聚糖复合支架对hUCMSCs成软骨诱导的实验研究*

蔡第心1，何鹏举2，谭洪波2，丁晶2，余开富2，张颖2，周田华2，杨军2，徐永清2△

(1.昆明医科大学骨科，昆明 650000；2.成都军区昆明总医院骨科,昆明 650000)

目的探讨以人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)作为软骨组织工程种子细胞，Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架材料作为细胞载体及其细胞-支架复合体成软骨的可行性。方法制备Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖多孔支架，电镜观察测定支架材料的孔径、孔隙率和亲水性，对支架材料进行相应的组织学分析。培养鉴定P3代的hUCMSCs，将hUCMSCs混悬液接种到Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架上，不加诱导剂进行培养，3周后取出样品行甲苯胺蓝、番红精O染色，Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及扫描电镜观察。结果第3代hUCMSCs高度表达CD29、CD105等间充质细胞标志，几乎不表达CD34等内皮细胞、造血细胞标志。Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架材料呈白色多孔泡沫状，孔隙率为(91.8±2.17)%，孔径110～230 μm，分布均匀，相互贯通。吸水膨胀率为(213.71±1.31)%，亲水性良好。甲苯胺蓝、番红精O及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性。细胞-支架复合体在培养过程中可观察到有软骨样组织形成并逐步增多，甲苯胺蓝、番红精O及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性，电镜观察显示细胞在支架上增殖活跃，与材料黏附紧密，可见软骨样细胞及其周围大量交错连接的胶原纤维。结论hUCMSCs与Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架材料复合，可在体外不经诱导而初步构建组织工程软骨，为软骨损伤的修复奠定了一定的实验基础。……