三种猪肝DNA粗提取方法的比较

周颖慧 胡雪峰

(福建师范大学生命科学学院 福州 350108)

“DNA的粗提取与鉴定”是高中生物学实验的重点和难点。猪肝易获取且DNA含量丰富，适合作为实验材料。经查阅资料发现，现有猪肝粗提取DNA的方法中，存在破裂细胞膜不彻底和粗提取DNA过程不能很好除杂的问题，这些都对实验效果有一定的影响。为改良实验效果，本文设计实验分别用洗涤剂和SDS破裂细胞膜、改进实验除杂方法，比较了三种方法的实验效果，提出了优化方案。

1 实验原理

DNA位于细胞核中，可以使用洗涤剂裂解细胞膜与核膜，释放细胞核中的DNA。DNA在1～2 mol/L氯化钠溶液中溶解度较大，释放出来的DNA可较大量地溶解在氯化钠溶液中。溶解后的DNA中含有蛋白质等杂质，65℃高温使蛋白质变性，而DNA不降解。此外，还根据DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质可溶解于酒精溶液，得到杂质更少的DNA。

洗涤剂裂解细胞膜，其有效成分是SDS。SDS除了能够裂解细胞膜与核膜，还能与脂质和蛋白质结合，当溶液中SDS遇到钾离子时，钾离子可以置换SDS中的钠离子，而产生不溶于水的PDS沉淀从而可以去除蛋白质。

实验利用二苯胺鉴定DNA，其原理是DNA在高温和强酸的条件下，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂，2-脱氧核糖脱水后生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺反应生成蓝色物质。利用这一原理，在配制试剂时增加强酸的量[1]，将产生更多的ω-羟基-γ-酮基戊醛与二苯胺试剂反应，显色效果更明显。

2 材料用具

新鲜猪肝、2 mol/L的氯化钠溶液、蒸馏水、洗洁精、10%SDS溶液、10%氯化钾溶液、95%乙醇、二苯胺试剂，量筒、烧杯、试管、玻璃棒、试管夹、纱布、水浴锅、标签纸、剪刀、研钵、水浴锅、离心机。……