棉花粉蚧对木尔坦棉花曲叶病毒的获取、存留和传播风险

唐 远，何沐阳，陆永跃*

(1. 广西梧州市植物保护站，广西梧州543003；2. 华南农业大学昆虫学系，广州510642)



棉花粉蚧对木尔坦棉花曲叶病毒的获取、存留和传播风险

唐 远1,2，何沐阳2*，陆永跃2**

(1. 广西梧州市植物保护站，广西梧州543003；2. 华南农业大学昆虫学系，广州510642)

为明确棉花粉蚧Phenacoccussolenopsis对扶桑Hibiscusrosa-sinensis感染的木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)的传播风险，本文应用PCR方法研究了棉花粉蚧获取、存留和传播CLCuMV的规律和能力。结果表明棉花粉蚧各取食危害虫期均可获取、携带CLCuMV，获取病毒所需时间为2-48 h，虫体内病毒最多可存留312 h；但是，粉蚧体内病毒无法侵染健康扶桑，亦不会经卵或者交配进行垂直和水平传播。本研究证明了棉花粉蚧不能传播CLCuMV，为防治该虫、该病毒病提供了依据。

棉花粉蚧；木尔坦棉花曲叶病毒；传播风险

棉花粉蚧PhenacoccussolenopsisTinsley又名扶桑绵粉蚧，原产于美国(Williams and Granara De Willink，1992)，为近年新入侵我国的一种重要害虫(武三安和张润志，2009)。该虫1990年代在世界范围内开始扩散危害(陆永跃等，2008)，2005-2006年以来曾对印度和巴基斯坦棉区造成严重危害，使棉花减产50%，损失巨大(Wangetal.，2010; Kumaretal.，2014)。该虫寄主范围广，繁殖速度快、潜力大，可随植物及其包装物、载体、介质等调运进行远距离传播(陆永跃等，2008；Wangetal.，2010；胡婕等，2014)。自2008年我国发现棉花粉蚧以来，截至2015年全国已有15个省份报道其发生，且仍在不断扩散蔓延中。我国虽未报道棉花粉蚧对棉花造成明显危害，但风险分析表明该虫对我国棉花产业潜在威胁巨大(王艳平等，2009；Wangetal.，2010；马骏等，2011)。

植物生长过程中会遭受多种病原物侵染，由此产生的植物病害导致世界范围内农业损失达10%-30%(Williams and Herman，2012)。由病毒侵染导致的植物病毒病为其中一类较为严重的病害，通常难以防治(史晓斌等，2012)。大部分植物病毒可由昆虫作为介体传播(Power，2000)，如烟粉虱传播双生病毒引起多种曲叶病(卫静等，2015)，褐飞虱可传播水稻矮缩病毒Ricedwarfvirus(Chenetal.，2011)等。木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)是引发棉花毁灭性病害—棉花曲叶病的一种主要病原之一，主要经介体昆虫携带传播(何自福等，2010)。2006年我国就发现了CLCuMV，虽然目前尚未在我国棉花上检测到，但其已侵染了华南地区重要园林植物—扶桑Hibiscusrosa-sinensis，导致了黄化曲叶病，并且发生分布已经较为普遍(林林等，2011；唐远和陆永跃，2013)。扶桑上该病毒的分离物可成功侵染棉花，被侵染棉花表现曲叶病典型症状(何自福等，2010)。扶桑是棉花粉蚧的主要嗜食寄主之一，棉花粉蚧可在感染木尔坦棉花曲叶病毒的扶桑上发生危害。研究表明多种粉蚧可传播病毒，其中榕臀纹粉蚧Planococcusficus、桔臀纹粉蚧Planococcuscitri、拟长尾粉蚧Pseudococcusaffinis、柑橘栖粉蚧Pseudococcuslongispinus和长尾粉蚧Pseudococcuscalceolariae等皆可传播葡萄卷叶病毒(潘志勇和翟衡，2001)。作为我国棉花产业潜在危害极大的入侵害虫，棉花粉蚧是否会携带、传播木尔坦棉花曲叶病毒?解释此问题将对防治棉花曲叶病有重要价值，亦对准确把握和定位棉花粉蚧的危害有指导作用。本文采用分子生物学方法研究了棉花粉蚧对CLCuMV的获取、存留和传播，明确了该虫传播该病毒的风险。

1　材料与方法

1.1实验材料

1.1.1供试虫源

在华南农业大学昆虫学系检疫与入侵害虫实验室人工气候箱里(28℃±1℃，RH 60%-65%，光照周期(L ∶D)14 h ∶10 h)，以扶桑为寄主饲养、建立种群，实验时选取各龄健康虫态备用。

1.1.2供试寄主

扶桑幼苗种植于室内(温度28℃±1℃，RH 60%-65%)塑料花盆(直径20 cm，高30 cm)中，常规管理，不使用任何农药防治病虫害，实验时选取约35 cm高健壮植株备用。

1.1.3感染CLCuMV的扶桑

染病扶桑样品采自于广州华南农业大学校园五山学生公寓周围绿化带，经病毒分子序列测定后确认携带有CLCuMV的扶桑标记为病毒来源植株。

1.1.4主要实验试剂

氯仿、异戊醇、异丙醇、无水乙醇均为分析纯，购自于广州化学试剂厂；Tris-Cl、NaCl、EDTA、Taq酶、dNTPs、PCR buffer、DNA marker DL2000、琼脂糖等购自于宝生物工程(大连)有限公司；蛋白酶K购自于天根生化科技(北京)有限公司；检测所用引物于生工生物工程(上海)股份有限公司合成；48%吡虫啉悬浮剂购自于陕西美邦农药有限公司，兑水配成3%水溶液备用。

1.1.5主要实验仪器

梯度PCR扩增仪Mastercycle Pro、高速冷冻离心机Eppendorf 5417R，德国艾本德股份公司；电泳仪BG-subMIDI，北京百晶生物技术有限公司；凝胶成像系统BIO-RAD Gel Doc XR，美国BIO-RAD 公司；超净工作台SIV-CI-ZFD，广州深华科技有限公司；低温冰箱ULT Freezer，美国Thermo Forma公司；恒温培养箱DHP-9162，上海一恒科技仪器有限公司；灭菌锅HV-110，日本HIRAYAMA公司；电子天平ALC-1100.2，珠海天创仪器有限公司；智能人工气候箱RXZ，宁波江南仪器厂。

1.2实验方法

1.2.1扶桑及棉花粉蚧DNA提取

在温硕洋和何晓芳(2003)的方法基础上进行一些修改(唐远和陆永跃，2013)。取单头粉蚧(1龄若虫取10头)放入1.5 mL离心管，先加入6 μL STE(100 mM NaCl；10 mM Tris-Cl，pH8.0；1 mM EDTA，pH8.0)，研磨匀浆，加入54 μL STE清洗研磨杵，再加入6 μL蛋白酶K(200 μg/mL)，研磨液在56℃恒温器中消化2 h，消化后的产物在95℃孕育45 s，14000 r/min离心1 min沉淀残渣，上清液作为做PCR的模板或保存在-20℃冰箱中备用。

1.2.2CLCuMV的PCR扩增

根据CLCuMV的DNA-A区域来设计特异引物，预期扩增长度为580 bp(唐远和陆永跃，2013)(表1)。

表1　CLCuMV特异引物MJ-r及MJ-f的碱基序列

扩增体积为25 μL：含模板DNA(扶桑总DNA)1 μL，20 μmol/L正向引物和反向引物各1 μL，2.5 mM dNTP混合液2 μL，5 U/μL Taq酶0.2 μL，10×buffer(含镁离子)2.5 μL，无菌双蒸水17.3 μL。

扩增条件：94℃预变性4 min；94℃ 45 s；56℃ 45 s；72℃ 1 min；扩增35个循环；最后72℃延伸10 min。扩增反应结束后，取PCR特异性扩增产物5 μL在2%琼脂糖凝胶上进行电泳检测(电压72 V，电泳缓冲液为1×TAE)，紫外灯下观察结果，以明确目的基因的存在与否及扩增片段的大小。

1.2.3棉花粉蚧获取木尔坦棉花曲叶病毒时间的测定

将100头棉花粉蚧3龄若虫饥饿12 h后，置于已放有6片染病扶桑幼嫩叶片的培养皿(Φ15 cm)中，用保鲜膜封好皿口，用昆虫针在膜上扎出100个小孔供空气流通，放入人工气候箱(温度28℃±1℃，相对湿度60%-65%)中培养。以在健康植株上取食的粉蚧为对照。于接虫后0、1、2、4、8、12、24、48 h分别从皿中随机取10头粉蚧，置于-40℃保存，用于单头粉蚧CLCuMV的PCR检测，试验重复3次。

粉蚧带毒率(%)=(检测到携带CLCuMV DNA的粉蚧个体数量/被检测的所有粉蚧个体数量)×100。

1.2.4棉花粉蚧体内CLCuMV存留时间的测定

1.2.3试验结果证实取食带病毒叶片48 h后3龄粉蚧带病毒率为100%。取已饲毒48 h的3龄若虫250头，接到4株经PCR检测无CLCuMV的健康扶桑上，并用防虫笼隔离，在室内条件下饲养。于接虫后0、12、24、36、48、72、96、120、168、240、312、360、480 h分别随机取10头粉蚧，置于-40℃保存，并用PCR检测单头粉蚧CLCuMV。重复2次。

1.2.5棉花粉蚧传播CLCuMV能力的检测

关于粉蚧传毒研究发现饲毒24 h的10头葡萄粉蚧对寄主的接种停留时间(inoculation access period，IAP)24 h时对GLRaV-3传毒率为100%(Tsaietal.，2010)，饲毒24 h的15头烟粉虱对寄主的IAP达24 h后对TYLCV传毒率也为100%(Mansour and Al-Musa，1992)。因此，本试验将已饲毒48 h的棉花粉蚧3龄若虫200头接种在10株经PCR检测无CLCuMV的健康扶桑苗的幼嫩部位上，每株接种20头，接种后用防虫笼隔离饲养。接种停留时间为48 h后将植株上粉蚧全部移除，并喷洒3%吡虫啉液处理植株，然后隔离观察扶桑叶片是否产生由CLCuMV引起的症状，并在15 d后采集植株嫩叶检测CLCuMV。

1.2.6棉花粉蚧不同龄期携带CLCuMV能力的检测

1龄若虫：选择个体大小相近的棉花粉蚧1龄若虫100头，饥饿8 h，其他培养方法同1.2.3。由于1龄粉蚧个体微小，用单头粉蚧提取到的DNA含量非常少，在常规PCR中难以扩增出条带，因此在饲毒48 h后随机取出10头1龄粉蚧为一个样品，放入2 mL的离心管中，置于-40℃保存，用PCR检测粉蚧CLCuMV。重复5次。

2龄若虫：选择个体大小相近的棉花粉蚧2龄若虫50头，饥饿8 h，其他培养方法同1.2.3。饲毒48 h后随机抽取5头粉蚧放入2 mL的离心管中，置于-40℃保存，用PCR检测单头粉蚧CLCuMV。重复5次。

3龄若虫、雌成虫的处理方法同上。

1.2.7棉花粉蚧经卵传播体内CLCuMV能力的检测

选择棉花粉蚧3龄末期若虫20头，饥饿8 h后，其他培养方法同1.2.3。每隔2 d更换一次病叶，等粉蚧蜕皮成为成虫10 d后，将全部已饲毒粉蚧移至放有健康扶桑叶片的培养皿里继续饲养，然后每天向培养皿里放入5头雄虫供交配，直至雌虫产生卵囊以后。一是拨开卵囊，随机挑取20粒卵放入2 mL离心管中，置于-40℃保存，用PCR检测CLCuMV。重复5次。二是待1龄若虫出现后随机挑取10头1龄若虫放入2 mL的离心管中，置于-40℃保存，用PCR检测CLCuMV。重复5次。

2　结果与分析

2.1棉花粉蚧获取木尔坦棉花曲叶病毒时间

接毒后0 h、1 h后检测到的棉花粉蚧带毒个体数量均为0头，接毒后2、4、8、12、24、48 h后检测到的带毒个体总数分别为2头、12头、19头、25头、27头、30头；由此，计算出接毒0、1、2、4、8、12、24、48 h后棉花粉蚧获毒率分别为0、0、6.67%、40%、63.33%、83.33%、90%、100%(图1)。饲毒2 h后就能从粉蚧体内检测到CLCuMV的存在，饲毒4 h后粉蚧的获毒率明显提高，上升到了40%；随着饲毒时间增加，粉蚧获毒率仍呈上升趋势，到饲毒12 h后，获毒率在80%以上，趋于稳定；饲毒48 h，粉蚧获毒率为100%。

图1　扶桑绵粉蚧获取木尔坦棉花曲叶病毒的时间Fig.1　Virus acquisition time for Phenacoccus solenopsis

2.2棉花粉蚧体内CLCuMV的存留时间

从图2可看出，脱离病毒侵染植株后短时间内(0-24 h)棉花粉蚧若虫带毒个体比率较为稳定，在95%以上；之后迅速降低，40 h后处于低水平稳定阶段，带毒率在5%-15%。在棉花粉蚧体内检测到CLCuMV的最长时间为312 h，仅检测到1头粉蚧带毒。

图2　棉花粉蚧体内CLCuMV的存留时间动态Fig.2　Retention time dynamic of ClCuMV in Phenacoccus solenopsis

图3　不同处理时间棉花粉蚧体内CLCuMV的DNA凝胶电泳条带对比Fig.3　Comparison of DNA gel electrophoresis for CLCuMV in Phenacoccus solenopsis at different intrevals after leaving the infected plant注：C36、C48、C240、C312分别为粉蚧脱离病毒侵染植株后36、48、240、312 h。Note: C36, C48, C240, and C312 represented 36, 48, 240, and 312 h, respectively, after the mealybug leaving the infected plant.

从检测粉蚧体内病毒的电泳图可观察到，不同时间长度的病毒DNA条带明暗程度也有很大差异，随着时间延长DNA条带亮度逐渐变暗(图3)。36 h、48 h时病毒DNA条带比较清晰明亮，而240 h、312 h时两条条带都非常暗淡。这说明粉蚧体内CLCuMV不能复制增殖，而是不断减少，360 h、480 h时已经完全检测不到CLCuMV DNA的存在了。

2.3不同虫期棉花粉蚧携带CLCuMV的能力

检测结果表明取食含有CLCuMV扶桑叶片48 h 后均能从各虫态粉蚧体内检测到CLCuMV，其中1龄若虫样品阳性数量为4份，带毒率为80%；2龄若虫、3龄若虫、雌成虫CLCuMV检出样品数量均为5份，带毒率为100%(表2)。

表2　棉花粉蚧不同虫期携带CLCuMV的比率

2.4棉花粉蚧经卵或者交配传播CLCuMV的能力

结果显示，带毒成虫所产卵、1龄若虫中均未检测到CLCuMV的存在。因此，可确定棉花粉蚧不能经卵将CLCuMV传播给子代。对于与带毒雌虫交配的雄虫检测结果表明，10头雄虫体内均未检测到CLCuMV，因此，认为棉花粉蚧不能通过交配方式将CLCuMV传播给雄虫。

2.5棉花粉蚧在寄主植物间传播CLCuMV的能力

未发现健康扶桑叶片产生由CLCuMV所引起的症状，PCR检测未发现扶桑植株里有CLCuMV。因此，经IAP 48 h接种带毒棉花粉蚧，不能在扶桑之间传播CLCuMV。

3　结论与讨论

本试验应用PCR检测方法研究了棉花粉蚧对CLCuMV获取、存留及传播能力。结果表明，各虫期粉蚧均具有携带CLCuMV能力。其中，3龄若虫获取该病毒所需时间为2-48 h，明显长于烟粉虱对同为双生科病毒的番茄黄化曲叶病毒的获毒时间(仅需5-10 min)(Atzmonetal.，1998)。棉花粉蚧体内CLCuMV残留随着时间推移而减少，存留时间至少为36 h，最长为312 h。

研究发现200头带毒棉花粉蚧对扶桑的传毒率为0。由于本实验使用的为饲毒48 h且在植株的停留时间为24 h的3龄若虫(经测定带毒率为100%)，而考虑到烟粉虱获取棉花曲叶病毒仅需15 min-4 h(Mann，2011)，带毒粉蚧传播葡萄卷叶病毒GLRaV-III的传毒率在IAP 24 h达到峰值(Chiweietal.，2010)，故应不存在获毒失败的可能，而在之后的检测中并未在扶桑植株中发现CLCuMV。因此，认为棉花粉蚧虽然可短期携带CLCuMV，但是不能向健康植株传播。此外，该虫不能经卵将CLCuMV传给子代，也不能通过交配将病毒传给雄虫。该病毒应不能在棉花粉蚧体内循环增殖。综上所述，棉花粉蚧基本上不存在传播CLCuMV的风险，其危害方式应不包括对棉花曲叶病的传播。

References)

Atzmon G, Oss HV, Czosnek H. PCR-amplification of tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) DNA from squashes of plants and whitefly vectors: Application to the study of TYLCV acquisition and transmission [J].EuropeanJournalofPlantPathology, 1998, 104 (2):189-194.

Chen H, Qian C, Omura T,etal. Sequential infection ofRicedwarfvirus, in the internal organs of its insect vector after ingestion of virus [J].VirusResearch, 2011, 160 (1-2):389-394.

He ZF, Dong D, Li SF,etal. Threat ofcottonleafcurlmultanvirusto China cotton production [J].PlantProtection, 2010, 36 (2):147-149. [何自福, 董迪, 李世访, 等. 木尔坦棉花曲叶病毒已对我国棉花生产构成严重威胁 [J]. 植物保护, 2010, 36(2): 147-149]

Hu J, Gong WR, Chu SP. Invasion risk analysis ofPhenacoccussolenopsisTinsley in Jiangsu [J].ChinaPlantProtection, 2014, 34 (3):68-70.[胡婕, 龚伟荣, 褚姝频. 扶桑绵粉蚧入侵江苏的风险分析 [J]. 中国植保导刊, 2014, 34 (3):68-70]

Kumar R, Nagrare VS, Nitharwal M,etal. Within-plant distribution of an invasive mealybug,Phenacoccussolenopsis, and associated losses in cotton [J].Phytoparasitica, 2014, 42 (3):311-316.

Lin L, Cai JH, Luo EB,etal. Molecular identification and host range of a geminivirus infecting Hibiscus in Nanning City [J].PlantProtection, 2011, 37 (4):44-47. [林林, 蔡健和, 罗恩波, 等. 南宁市朱槿曲叶病毒病病原分子鉴定和寄主范围研究 [J]. 植物保护, 2011, 37 (4):44-47]

Lu YY, Zeng L, Wang L,etal. Precaution of solenopsis mealybugPhenacoccussolenopsisTinsley [J].JournalofEnvironmentalEntomology, 2008, 30 (4):386-387. [陆永跃, 曾玲, 王琳, 等. 警惕一种危险性绵粉蚧入侵中国 [J]. 环境昆虫学报, 2008, 30 (4):386-387]

Ma J, Hu XN, Peng ZQ,etal. The potential geographical distribution ofPhenacoccussolenopsisTinsley based on the CLIMEX in China [J].PlantQuarantine, 2011, 25 (1):5-8. [马骏, 胡学难, 彭正强, 等. 基于CLIMEX模型的扶桑绵粉蚧在中国潜在地理分布预测[J]. 植物检疫, 2011, 25 (1):5-8]

Mann RS.BemisiatabaciInteraction with, Cotton Leaf Curl Virus. The Whitefly,Bemisiatabaci(Homoptera: Aleyrodidae) Interaction with Geminivirus-Infected Host Plants [M]. Netherlands: Springer, 2011.

Mansour A, Al-Musa A.Tomatoyellowleafcurlvirus: Host range and virus-vector relationships [J].PlantPathology, 1992, 41 (2):122-125.

Pan ZY, Zhai H. Research progress of Grapevine leaf roll disease [J].Sino-overseasGrapevine&Wine, 2001, (2):62-65. [潘志勇, 翟衡. 葡萄卷叶病研究进展 [J]. 中外葡萄与葡萄酒, 2001, (2):62-65]

Power AG. Insect transmission of plant viruses: A constraint on virus variability [J].CurrentOpinioninPlantBiology, 2000, 3 (4):336-340.

Qian LC, Liu YL. Molecular mechanism of plant antiviral defense [J].ScientiaSinicaVitae, 2014, 44 (10):999-1009. [钱礼超,刘玉乐. 植物抗病毒分子机制 [J]. 中国科学: 生命科学, 2014, 44 (10):999-1009]

Shi XB, Xie W, Zhang YJ. Advances in the characteristics and mechanisms of the transmission of plant viruses by insect vectors [J].ActaEntomologicaSinica, 2012, 55 (7):841-848. [史晓斌, 谢文, 张友军. 植物病毒病媒介昆虫的传毒特性和机制研究进展 [J]. 昆虫学报, 2012, 55 (7):841-848]

Tang Y, Lu YY. Confirmation of the virus infecting and causing theHibiscusrosa-sinensisyellow leaf curl disease in Guangdong[J].GuangdongAgriculturalSciences, 2013, 40(10):80-82.[唐远, 陆永跃. 广东地区引起扶桑黄化曲叶病的病毒种类确定[J]. 广东农业科学, 2013, 40(10):80-82]

Tsai CW, Rowhani A, Golino DA,etal. Mealybug transmission of Grapevine leafroll viruses: An analysis of virus-vector specificity [J].Phytopathology, 2010, 100 (8):830-834.

Wang Y, Watson GW, Zhang R. The potential distribution of an invasive mealybugPhenacoccussolenopsisand its threat to cotton in Asia[J].AgriculturalandForestEntomology, 2010, 12(4): 403-416.

Wang YP, Wu SA, Zhang RZ. Pest risk analysis of a new invasive pest,Phenacoccussolenopsis, to China [J].ChineseBulletinofEntomology, 2009, 46 (1):101-106. [王艳平, 武三安, 张润志. 入侵害虫扶桑绵粉蚧在中国的风险分析 [J]. 昆虫知识, 2009, 46 (1):101-106]

Wei J, Wang XW, Liu SS. Research progress in geminivirus transmission by whiteflies (Hemiptera:Aleyrodidae) and the underlying molecular mechanisms [J].ActaEntomologicaSinica, 2015, 58 (4):445-453. [卫静, 王晓伟, 刘树生. 烟粉虱传播双生病毒的特性及分子机制研究进展 [J]. 昆虫学报, 2015, 58 (4):445-453]

Wen SY, He XF. A method of rapid preparation of trace-DNA templates of insects for PCR [J].EntomologicalKnowledge, 2003, 40 (3):276-279. [温硕洋, 何晓芳. 一种适用于昆虫痕量DNA模板制备的方法 [J]. 应用昆虫学报, 2003, 40 (3):276-279]

Williams DJ, Willink MCGD. Mealybugs of central and South America[J]. Wallingford: CAB International, 1992, (2):337-338.

Williams M, Herman M. Fighting for their lives: Plants and pathogens [J].PlantCell, 2012, (6):1-15.

Wu SA, Zhang RZ. A new invasive pest,Phenacoccussolenopsis, threatening seriously to cotton production [J].EntomologicalKnowledge, 2009, 46 (1):159-162.[武三安, 张润志. 威胁棉花生产的外来入侵新害虫——扶桑绵粉蚧 [J]. 应用昆虫学报, 2009, 46 (1):159-162]

Acquisition, retention and transmission risk ofCottonleafcurlMultanvirusby cotton mealybugPhenacoccussolenopsisTinsley

TANG Yuan1,2, HE Mu-Yang2*, LU Yong-Yue2**

(1. Wuzhou Plant Protection Station, Wuzhou 543003, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; 2. Department of Entomology, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

To indentify the risk of spreading CLCuMV by cotton mealybugPhenacoccussolenopsisTinsley, it was tested that the abilities and dynamics ofP.solenopsisto acquire, conserve and transmit the virus by PCR method. The results showed that all feeding stages could acquire the virus in 2-48 h, and the virus could remain in mealybug bodies for the maximum of 312 h. However, CLCuMV in cotton mealybug nymphs was unable to infect the healthyHibiscusrosa-sinensis, and it did not transmit vertically and horizontally by oviposition and mating. This study cleared the risk ofP.solenopsistransmitting CLCuMV and provided the basis for the management of the two pests.

PhenacoccussolenopsisTinsley; CLCuMV; transmission risk

国家自然科学基金(31171855);广东省研究生教育创新计划(2013JDXM14)

唐远，男，1988年生，广西梧州人，硕士，研究方向为昆虫生态学，E-mail:ty06865@qq.com

*共同第一作者，E-mail: hemuyang@stu.scau.edu.cn

**

Author for correspondence，E-mail：luyongyue@scau.edu.cn

2016-01-07；接受日期Accepted： 2016-03-23

Q965;S433

A

1674-0858(2016)04-0736-06