稳定沉默TIPE2后削弱Poly I：C诱导的人单核/巨噬细胞凋亡

江洁曙　王珊珊　方晶晶　徐　意　叶小磊.宁波大学医学院附属医院ICU，浙江宁波　3500；.宁波大学医学院附属医院急诊科，浙江宁波　3500；3.宁波市医学科学研究所，浙江宁波　3500

稳定沉默TIPE2后削弱Poly I：C诱导的人单核/巨噬细胞凋亡

江洁曙1王珊珊1方晶晶1徐意2叶小磊3▲
1.宁波大学医学院附属医院ICU，浙江宁波315020；2.宁波大学医学院附属医院急诊科，浙江宁波315020；3.宁波市医学科学研究所，浙江宁波315020

目的观察TIPE2稳定沉默后对TLR激动剂Po1y I：C诱导THP-1凋亡的影响。方法以THP-1细胞为研究对象，使用不同TLR激活剂与THP-1细胞孵育后，采用荧光定量PCR检测TIPE2 mRNA表达。应用慢病毒技术稳定沉默TIPE2表达后，MTT法检测细胞增殖，Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡，免疫印迹分析TIPE2沉默后Caspase-8表达水平变化。 结果TLRs激活剂中TLR3特异性激活剂Po1y I：C可以显著上调TIPE2的表达（P＜0.05），随作用时间延长，可显著抑制THP-1细胞增殖，并可诱导细胞凋亡。利用慢病毒技术稳定沉默THP-1细胞中TIPE2表达以后，可显著削弱Po1y I：C诱导的TIPE2表达（P＜0.05），TIPE2沉默后，Po1y I：C抑制THP-1增殖和诱导细胞凋亡的效应显著削弱，随后免疫印迹的结果显示，Caspase-8的活化形式，p41/42表达下调。结论Po1y I：C通过上调TIPE2表达可抑制THP-1细胞增殖，并可诱导细胞凋亡，稳定沉默TIPE2后可一定程度削弱上述效应，可能与下调Caspase-8的活性形式表达有关。

Poly I：C；TIPE2；免疫；TLR；凋亡

［Abstract］Objective To investigate the inf1uence of stab1y si1ent TIPE2 on THP-1 apoptosis induced by TLR agonist Po1y I：C.Methods THP-1 ce11s were se1ected as the study subjects.The expression of TIPE2 mRNA was detected by f1uorogenic quantitative PCR after incubation of THP-1 ce11s with different TLR activating agents.After stab1e si1ence of TIPE2 by 1entivira1 technique，the ce11 pro1iferation was detected by MTT，apoptosis was detected by Annexin V/PI doub1e-staining method，and changes of Caspase-8 expression 1eve1 after si1ence of TIPE2 was ana1yzed by western b1ot.Results TLR3 specific activator Po1y I：C cou1d significant1y up-regu1ate the expression of TIPE2（P＜0.05）.A1ong with the time of action，it cou1d significant1y inhibit the pro1iferation of THP-1，and induce apoptosis.Stab1e si1ence of TIPE2 in THP-1 by 1entivira1 technique cou1d significant1y impair the TIPE2 expression induced by Po1y I：C（P＜0.05）. After si1ence of TIPE2，the effects of Po1y I：C on inhibition the pro1iferation of THP-1 and induction of apoptosis were significant1y impaired，and the resu1t of fo11owing western b1ot showed active form of Caspase-8 and down-regu1ation of p41/42 expression.Conclusion By up-regu1ating the expression of TIPE2，Po1y I：C can inhibit the pro1iferation of THP-1，and induce apoptosis，which can be partia11y impaired by stab1e si1ence of TIPE2，possib1y due to down-regu-1ation of Caspase-8 active form expression.

［Key words］Po1y I：C；TIPE2；Immune；TLR；Apoptosis

免疫系统内稳态的维护机制极其复杂和神秘，改变调控免疫细胞死亡或者活化扩增免疫细胞均可以打破免疫细胞的内稳态环境，最终带来极为致命的炎性疾病，目前研究发现一组超家族蛋白对免疫系统的内稳态维持至关重要。……