奶粉中阴沟肠杆菌实时荧光PCR快速检测方法建立

周慧平　　唐连飞　　蔡文杰　　谭建锡　　朱中武　　禹思宇*

（1.湖南出入境检验检疫局　　湖南长沙　410004；2.湖南省畜牧兽医研究所）

奶粉中阴沟肠杆菌实时荧光PCR快速检测方法建立

周慧平1唐连飞1蔡文杰2谭建锡1朱中武1禹思宇1*

（1.湖南出入境检验检疫局湖南长沙410004；2.湖南省畜牧兽医研究所）

为建立快速有效的阴沟肠杆菌检测方法，根据Genbank中的阴沟肠杆菌Amp C酶基因序列设计引物和探针，建立了奶粉中阴沟肠杆菌实时荧光PCR快速检测方法。结果显示，该方法只对阴沟肠杆菌Amp C酶基因呈阳性反应，而对其他常见非阳性菌株基因组DNA均呈阴性反应，检测限为20 CFU/mL，对人工污染的奶粉样品检测验证了方法的实用性。建立的实时荧光PCR方法特异性强，灵敏度高，可以快速、准确检测奶粉中污染的阴沟肠杆菌。

阴沟肠杆菌；AmpC酶；实时荧光PCR；检测

1　　前言

阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）属于肠杆菌科肠杆菌属，为革兰氏阴性粗短杆菌，能产生广谱Amp C酶和β-内酰胺酶（ESBLs），是一种条件致病菌，平时广泛分布于自然界中，于人和动物的肠道中普遍存在，既可引起食源性疾病，又是医院内感染和机会感染的重要致病菌［1］。在抗生素选择性压力下，阴沟肠杆菌的耐药机制不断发展，已产生多重耐药性，给临床治疗带来新的挑战［2-5］。近年由阴沟肠杆菌引起婴幼儿腹泻的发病率有逐年增高的趋势，作为婴幼儿食源性疾病的致病菌，阴沟肠杆菌已引起广泛关注。

食品中尤其是奶粉中阴沟肠杆菌的污染一直受到人们的关注。即使阴沟肠杆菌在婴儿奶粉中含量很低，联合国粮农组织和世界卫生组织的专家仍认为阴沟肠杆菌引起新生儿致病的危险性越来越大，是潜在的婴儿奶粉病原菌。……