钙调蛋白镁结合位点突变体载体的构建、表达纯化及鉴定

赵美眯，李　卓，邵冬雪，梁洪玥，晏　珊，封　瑞，孙雪菲，郭　凤，郝丽英

（中国医科大学药学院药物毒理学教研室，沈阳110122）

钙调蛋白镁结合位点突变体载体的构建、表达纯化及鉴定

赵美眯，李卓，邵冬雪，梁洪玥，晏珊，封瑞，孙雪菲，郭凤，郝丽英

（中国医科大学药学院药物毒理学教研室，沈阳110122）

目的构建钙调蛋白3种镁离子结合位点突变体的质粒载体，并进行表达纯化及鉴定，为深入研究钙调蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用钙调蛋白cDNA进行点突变，制备3种镁离子结合位点突变的cDNA。将突变后的cDNA分别插入pGEX-6P-3载体，制备钙调蛋白突变体载体质粒。质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞，培养大肠杆菌，并诱导GST融合蛋白表达。利用Glutathione-Sepharose 4B珠子和PreScission蛋白酶分离纯化蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序证实成功构建钙调蛋白突变体质粒；表达纯化得到的钙调蛋白突变体经电泳图鉴定纯度较高，浓度约1.0 mg/mL。结论本研究成功构建了钙调蛋白镁结合位点突变体融合蛋白原核表达质粒，分离纯化可获得较高浓度较高纯度的钙调蛋白突变体。

钙调蛋白；突变体；融合蛋白；pGEX-6P-3

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钙调蛋白（calmodulin，CaM）是一种广泛存在于生物体的钙结合蛋白。它与体内多种蛋白相互作用产生各种生物学效应，是生命活动过程中不可缺少的细胞因子［1-2］。研究发现CaM不仅可与经典的钙离子通道蛋白相互作用，而且可与钾离子通道［3］、钠离子通道［4］，以及非选择性阳离子通道［5］直接作用，但其作用机制有待深入研究。本研究拟构建新的CaM突变体，以便进一步研究其生物学功能及其对各种离子通道的调节作用。……