Eps8抗原改造表位HLA-A*0201限制性抗肿瘤能力观察

姜春俊，周炜均，谢晓灵，杜静文，张宏毫，贺艳杰，李玉华

(南方医科大学珠江医院，广州510282)



·论著·

Eps8抗原改造表位HLA-A*0201限制性抗肿瘤能力观察

姜春俊，周炜均，谢晓灵，杜静文，张宏毫，贺艳杰，李玉华

(南方医科大学珠江医院，广州510282)

目的观察人表皮生长因子受体通路底物8(Eps8)抗原改造表位是否有人白细胞抗原A(HLA-A)*0201限制性抗肿瘤能力。方法 替换Eps8抗原锚定位点氨基酸获得改造肽，用BIMAS、SYFPEITHI在线数据库及Aotodock 4.2软件预测改造表位与HLA-A*0201分子的结合力，筛选出稳定结合的改造表位E1-9V(ILDDIEFFV)、E1-1Y9V(YLDDIEFFV)。用经典肽结合力实验检测各改造表位与HLA-A*0201分子的亲和力。制备天然表位(E1)、E1-9V、E1-1Y9V特异性杀伤性T淋巴细胞(CTLs)。用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测并比较E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7细胞、沉默Eps8的MCF-7细胞(MCF-7/shRNA)和抗HLA-A2抗体预孵育的MCF-7细胞(MCF-7/A2Ab)的杀伤率，E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251、K562、IM-9细胞的杀伤率，E1、E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率。结果 E1-9V、E1-1Y9V均可与HLA-A*0201分子B、F对接口袋的氨基酸形成稳定氢键。肽结合力实验结果显示E1-9V、E1-1Y9V与HLA-A*0201均具有高亲和力，且高于天然表位E1，P均<0.05。E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对MCF-7/shRNA、MCF-7/A2Ab细胞杀伤率明显低于MCF-7细胞，P均<0.05。 E1-9V、E1-1Y9V特异性CTLs对SW480、U251细胞杀伤率明显高于K562、IM-9细胞(P均<0.05)。E1-1Y9V特异性CTLs对T2细胞的杀伤率显著高于E1、E1-9V特异性CTLs，P均<0.05。结论 Eps8抗原改造表位E1-9V、E1-1Y9V与天然表位E1相比具有更高的HLA-A*0201分子亲和力，保留了原有的免疫原性，并且E1-1Y9V抗肿瘤免疫效应强于天然表位E1。

表皮生长因子受体通路底物8；抗原改造改造表位；细胞毒性T淋巴细胞；肿瘤疫苗；人白细胞抗原A*0201

恶性肿瘤严重威胁着人类健康，随着分子肿瘤学的发展，肿瘤的治疗理念发生了新的转变，近年来肿瘤免疫治疗逐渐兴起[1]。多肽疫苗具有易生产、安全性好、特异靶向肿瘤组织、特异性免疫反应强等特点，已成为肿瘤免疫治疗领域的一个热点。近年来，多种肿瘤抗原肽疫苗已进入临床试验阶段，并取得令人兴奋的结果[2, 3]。寻找多肽疫苗新靶点及对优势肽进行改造以提高其免疫原性和体内稳定性成为首要任务。……