采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产KPC大肠埃希菌ST131和ST405分型的研究

黄永禄，李佳萍，顾丹霞，林晓伟，吕火烊，张 嵘

采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产KPC大肠埃希菌ST131和ST405分型的研究

黄永禄1，李佳萍1，顾丹霞2，林晓伟2，吕火烊2，张 嵘1

目的 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）快速检测产KPC大肠埃希菌ST131、ST405，并对该方法的可行性进行评价。方法 收集浙江省人民医院临床分离46株大肠埃希菌，扩增blaKPC耐药基因，采用多位点序列分型方法（MLST）进行分型。MALDI-TOF MS对大肠埃希菌进行鉴定并对不同克隆的峰图进行主成分分析和算法统计，获得分型区分的特征峰。结果 46株KPC型大肠埃希菌均携带KPC-2耐药基因，MLST方法检测到2种ST型，分别为ST131和ST405。主成分分析图显示ST131和ST405可分为2簇，其中2株ST131和3株ST405分类错误。ClinProTools软件4种算法结果基本相似，方法特异度和灵敏度分别为93.27 %和97.92 %。用于区分ST131和ST405的特征峰主要为8 331.84、4 166.44、4 860.21和2 783.66 Da。这4个峰区分具有统计学意义，有较高准确性。结论 采用MALDI-TOF MS可快速区分产KPC大肠埃希菌ST131和ST405，具有操作简单、耗时短、区分灵敏度和特异度高以及成本低等优点，能用于大肠埃希菌克隆分型研究。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱； 大肠埃希菌； 多位点序列分型； 质谱分型； ST131； ST405

大肠埃希菌是社区和医院感染的主要病原体，在2013年CHINET临床分离菌株中排名第一，检出率达19.86 %。自2008年中国杭州首次发现耐碳青霉烯大肠埃希菌后［1］，世界各地均有报道［2-5］，且发生率逐年增加。快速可靠地分辨耐碳青霉烯类大肠埃希菌不同克隆型对其传播和流行病学监测至关重要。目前，分型方法包括扩增片段长度多态性分析（AFLP）、随机扩增多态性DNA分析（RAPD）、脉冲场凝胶电泳（PFGE）以及多位点序列分析（MLST）等［6］。……