乳酸菌重组人碱性成纤维生长因子表达载体的构建及鉴定

蒋永洪　陈科全　陈学清

·短篇论著·

乳酸菌重组人碱性成纤维生长因子表达载体的构建及鉴定

蒋永洪陈科全陈学清

目的构建乳酸菌重组人碱性成纤维蛋白表达载体，为口服治疗炎症性肠病探索新途径。方法利用融合PCR技术，将Ptuf启动子及pePN终止子与USP45-bFGF融合，构建全长片段后克隆于pbluescript载体中，经验证后亚克隆于pTRKH2载体中。结果双酶切及DNA测序结果证实成功构建乳酸菌表达载体pTR-bFGF。结论乳酸菌表达载体pTR-bFGF为实现bFGF在乳酸菌表达及口服治疗炎症性肠病奠定了基础。

乳酸菌；重组人碱性成纤维生长因子；炎症性肠病

【Abstract】Objective To explore a new way for the oral treatment of inflammatory bowel disease by constructing the recombinant human basic fibroblast protein expression vector.Methods The Ptuf promoter, pePN terminator,USP45 and bFGF were spliced by fusion PCR technology.The full-length constructed cDNA fragment was cloned into pBlueScript vector,as well as the pTRKH2 vector after identification.Results DNA sequencing and double enzyme digestion results showed that the expression vector pTR-bFGF was successfully constructed.Conclusion The pTR-bFGF plasmid laid a foundation for expression of bFGF in lactobacillus and oral treatment of inflammatory bowel disease.

【Key words】Lactic bacteria;bFGF;Inflammatory bowel disease

炎症性肠病的病因尚未明确，其机制之一是受损黏膜屏障功能缺陷，从而引起局部的炎症反应，因此通过修复肠道黏膜屏障可有效减轻炎症反应。碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）是分子量约18 kD的单链多肽，由146个氨基酸组成，是成纤维生长因子家族成员[1]。bFGF可以促进细胞增殖、迁移，提高趋化活性[2]。乳酸菌作为食品级安全细菌，被广泛用于多肽表达和疫苗研究。本研究通过构建乳酸菌bFGF表达载体，旨在为口服治疗炎症性肠病提供一种新途径奠定基础。

材料和方法

一、材料

1.菌株、质粒

大肠杆菌DH5α（购自Takara公司），乳酸球菌IL1403、pbluescript、pMD-bFGF质粒由本实验室自存，pTRKH2质粒（美国Klaenhammer TR教授惠赠）。

2.主要试剂

2×Taq mix及Super mix（Genestar）、DL5000和2000 Maker（Takara公司）；限制性内切酶（Thermo Fisher），T4 DNA ligse（NEB），质粒提取试剂盒及PCR凝胶回收试验盒（Axygen）。基因组提取试剂盒（天根），氨苄抗生素及红霉素（Biosharp），在大肠杆菌浓度为100 μg/mL及250 μg/mL。

二、方法

1.乳酸菌IL1403基因组DNA提取

根据天根基因组提取试剂盒……