白藜芦醇对H2O2及TGF-β2诱导人小梁网细胞的影响及机制探讨

齐艳，赵秀娟，徐琳琪，吴旭东△，汪建涛

细胞与分子生物学

白藜芦醇对H2O2及TGF-β2诱导人小梁网细胞的影响及机制探讨

齐艳1，2，赵秀娟2，徐琳琪1，2，吴旭东2△，汪建涛1△

目的 观察过氧化氢（H2O2）及转化生长因子（TGF）-β2诱导人小梁网细胞（HTMCs）后对纤维连接蛋白（FN）、胶原蛋白1型（COL1）、核因子（NF）-κB P65蛋白和白细胞介素（IL）-1β基因表达的影响及白藜芦醇（RSV）的干预作用。方法 （1）选取汇合度70%～80%的HTMCs分为5组。实验组于无血清培养基中分别加入浓度为150、300、450、800 μmol/L的H2O2处理，对照组的培养基中不加H2O2。Western blot法检测各组FN、COL1、NF-κB P65、NF-κB P65磷酸化（P-NF-κB P65）蛋白的表达，实时定量PCR法检测IL-1β基因的表达。（2）HTMCs细胞分为3组。对照组以不含H2O2及RSV的无血清培基处理，H2O2组以300 μmol/L的H2O2处理，H2O2+RSV组同时加入300 μmol/L的H2O2及25 μmol/L的RSV处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。免疫荧光检测各组NF-κB P65 在HTMCs中的定位。（3）HTMCs细胞分为3组。对照组以不含TGF-β2及RSV的无血清培基处理，TGF-β2组以5 μg/L的TGF-β2处理，TGF-β2+RSV组为同时加入5 μg/L的TGF-β2及25 μmol/L的RSV处理。检测各组上述蛋白和基因的表达情况。结果 （1）与对照组比较，150、300、450、800 μmol/L组FN和P-NF-κB P65蛋白表达水平均增高，300、450、800 μmol/L组COL1蛋白和IL-1β基因表达水平增高（P＜0.05），其他指标比较差异均无统计学意义。（2）H2O2组较对照组FN、COL1、P-NF-κB P65蛋白和IL-1β基因表达水平均增高，而H2O2+RSV组较H2O2组上述指标均降低，H2O2+RSV组较对照组仅IL-1β降低（P＜0.05）。对照组仅细胞质表达NF-κB P65，H2O2组细胞胞质及核中均有NF-κB P65表达，且核中表达较多；H2O2+RSV组细胞胞质中表达NF-κB P65较核中多。（3）TGF-β2组较对照组FN、COL1、P-NF-κB P65的蛋白和IL-1β基因水平表达均增高（P＜0.05），TGF-β2+RSV组较TGF-β2组上述指标均降低（P＜0.05）。结论 H2O2和TGF-β2能上调HTMCs的FN、COL1、P-NF-κB P65蛋白及IL-1β基因的表达，可能参与青光眼的发生发展过程。RSV能抑制H2O2和TGF-β2对HTMCs的影响，对青光眼发挥一定的保护作用。……