柽柳液泡膜微囊蛋白的分离

杨桂燕　赵玉琳　郭宇聪　赵　震　高彩球

(1.林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学)，黑龙江 哈尔滨 150040；2.西北农林科技大学林学院，核桃研究中心，陕西 杨凌 712100)



柽柳液泡膜微囊蛋白的分离

杨桂燕1，2赵玉琳1郭宇聪1赵震1高彩球1

(1.林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学)，黑龙江 哈尔滨 150040；2.西北农林科技大学林学院，核桃研究中心，陕西 杨凌 712100)

采用差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心法分离和纯化柽柳液泡膜微囊，通过western杂交对获得的微囊蛋白进行检测，获得ThVHAc1蛋白目的条带，表明分离的液泡膜微囊中含有有效的V-ATPase成分，进一步测定液泡膜微囊对NaNO3、Na3VO3、NaN3的敏感性及V-ATPase的水解活性和翻转比例。结果表明：液泡膜微囊主要分布在0～25%蔗糖梯度界面上，且研磨法提取液泡膜微囊具有较高的水解活性和较大的原位比例，表明液氮研磨结合差速离心及不连续蔗糖密度梯度离心法能有效提取柽柳液泡膜微囊。

刚毛柽柳；液泡膜；V-ATPase；翻转比例

植物H+-ATPase对植物离子运输起重要作用，主要包括分布于细胞质膜上的P-ATPase、分布于叶绿体内类囊体膜和线粒体内膜上F-ATPase及分布于液泡膜上的V-ATPase[1]。其中，F-ATPase在其发挥作用过程中主要利用跨膜质子电化学势实现，而P-ATPase和V-ATPase主要利用ATPase水解产生的能量来驱动跨膜质子运动[2]。

V-ATPase是具有复杂结构和多亚基的复合蛋白，最基本的功能是维持细胞质内的酸碱性内平衡状态(pH内稳态)和建立跨膜电化学梯度,为相关的代谢提供能量[3-4]。当植物处于胁迫条件时，V-ATPase在调控过程中的作用具有复杂性和多样性，这不仅体现在V-ATPase本身的结构，也体现在其各个亚基的变化和调控上[5-6]。……