大鼠NKx6.1启动子克隆及特异性表达分析

王大玮 汪蓓蕾 姚远 陈皓 张欣 郭刚 张瑞

（天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 卫生部激素与发育重点实验室，天津 300070）

大鼠NKx6.1启动子克隆及特异性表达分析

王大玮 汪蓓蕾 姚远 陈皓 张欣 郭刚 张瑞

（天津医科大学代谢病医院内分泌研究所 卫生部激素与发育重点实验室，天津 300070）

旨在构建大鼠NKx6.l启动子的报告载体，验证转录因子T3R对NKx6.l启动子的调控活性。用PCR扩增大鼠脑组织NKx6.l的 5'上游启动子片段2.4 kb，应用生物信息学方法预测该片段上潜在的转录因子T3R结合位点，根据不同的结合位点作系列截短，获得3段长度不等的启动子缺失片段，分别克隆到荧光素酶报告基因表达质粒（pGL3-Basic）上，构建相应的报告载体。将报告载体和T3R共转染大鼠星形胶质细胞（rat astrocytes，RA），并检测报告基因荧光素酶的活性。结果显示，成功构建大鼠NKx6.l启动子报告载体，双荧光素酶报告基因活性检测表明T3R对NKx6.l启动子有明显调控作用，其中-1 887 bp-1 507 bp活性最高，即存在关键顺式调控元件。克隆并筛选出启动子核心区域，揭示了甲状腺激素对大鼠NKx6.l的表达调控机制。

同源盒基因NKx6.l；甲状腺激素；双荧光素酶报告检测；启动子活性

碘缺乏病（iodine deficiency disorders，IDD）的最大危害是导致不同程度的脑发育障碍，其具体的分子作用机制仍是当前的主要研究方向。同源盒基因Nkx6.1作为一种反式作用因子，与神经系统的分化与发育关系极为密切，对于甲状腺特异基因的表达有重要的作用［1］。Nkx6.1在胚胎期可影响神经元分化［2］，并在随后的脑发育及成熟阶段对髓鞘形成、神经元轴突-胶质细胞连接和维持髓鞘稳定等产生影响［3］。……