水稻端粒酶RNA候选序列的鉴定

朱莲莲，林高强，叶聪莹，黄　倩，刘小川

(浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所，杭州 310018)



水稻端粒酶RNA候选序列的鉴定

朱莲莲，林高强，叶聪莹，黄倩，刘小川

(浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所，杭州 310018)

端粒酶由端粒酶反转录蛋白和端粒酶RNA构成，端粒酶RNA中除模板序列保守外，其余区域的保守度极低，难以基于同源序列实施克隆。目前，植物中仅拟南芥端粒酶RNA得到了克隆。为了鉴定一条具水稻端粒酶RNA特征的候选序列，研究中进行了对模板序列单碱基T/A突变(5′-AAACCCTAA-3′)后的转基因愈伤组织端粒酶活性的比较，结果显示在缺乏dATP的端粒重复序列扩增法反应中，突变型的端粒酶活性明显高于未突变型；对体外延伸得到的端粒ssDNA进行测序分析，结果发现所测10条片段均含有突变特征序列；再对转基因植株进行端粒序列的检测，结果所测8个端粒序列中，有2个含有突变特征序列。因此，初步判断该候选序列为水稻端粒酶RNA基因。

水稻；端粒酶；端粒酶RNA；TRAP；定点突变

0　引　言

真核生物端粒酶是一种依赖于RNA的DNA聚合酶，是保证染色体末端结构稳定，维持细胞正常分裂的重要生物酶。它由端粒酶逆转录酶(Telomerase reverse transcriptase，TERT)和RNA亚基(Telomerase RNA，TER)组成，不管是体内还是体外环境[1-3]，对于端粒酶活性来说TERT和TER都是必不可少的核心组件，其中TER中含有决定端粒重复序列的一段短模板序列[4]。端粒酶以染色体3′末端为前导引物，以其自身的TER为模板合成串联重复序列(TTTAGGG)n，TER模板区直接决定了延伸的端粒末端序列。……