促红细胞生成素预处理在脑缺血性损伤中神经保护作用的体外研究

王晓芳，王　妮，吕晓红



促红细胞生成素预处理在脑缺血性损伤中神经保护作用的体外研究

王晓芳，王妮，吕晓红

目的在体外研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)预处理在脑缺血性损伤中的神经保护作用及其合适的剂量范围、时间窗。方法取处于生长稳定期的高纯度原代皮质神经元，分为正常对照组、糖氧夺获(OGD)损伤组、rhEPO预处理组。rhEPO预处理组是在不同时间(OGD损伤前24 h、48 h、72 h)给予不同浓度(0.01 U/ml、0.1 U/ml、1 U/ml、10 U/ml、100 U/ml)的rhEPO，最后以MTT比色法检测存活率，光镜下观察细胞形态变化。结果rhEPO(0.01 U/ml、0.1 U/ml、1 U/ml、10 U/ml)预处理可明显增加OGD损伤的原代皮质神经元的存活率(P<0.05)，其中当浓度为1 U/ml时保护作用最强(P<0.05)；rhEPO(1 U/ml)预处理24 h、48 h可明显增加OGD损伤的原代皮质神经元的存活率(P<0.05)，其中rhEPO预处理48 h的保护作用强于24 h。在光学显微镜下，观察到的细胞形态和数量的变化与以上结果相符。结论rhEPO预处理对OGD损伤的皮质神经元具有神经保护作用，其有效浓度为0.01～10 U/ml，其中最佳剂量为1 U/ml，其有效时间窗为OGD前48 h或24 h，最佳干预时间窗为OGD前48 h。

促红细胞生成素预处理；体外培养神经元；糖氧夺获；神经保护

近年来，促红细胞生成素对缺血性脑血管病的神经保护作用逐渐受到重视，目前利用重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin，rhEPO)防治缺血性脑血管病的研究以动物模型为主，但rhEPO难以通过血脑屏障，且容易受到其他因素干预，本研究于体外建立原代神经元糖氧夺获(oxygen-glucose deprivation，OGD)模型，以研究rhEPO预处理的神经保护作用。

1　材料和方法

1.1动物健康新生24 h内清洁级Wistar大乳鼠，雌雄不限，由吉林大学动物中心提供[实验动物质量合格证号为SCXK(吉)2013-0001]，做原代皮质神经元的培养。

1.2主要试剂rhEPO(沈阳三生制药股份有限公司，10000 kU/L，生产批号：201506114V)；无糖DMEM培养基(Gibco公司，美国)；Neurobasal-A培养基(Gibco公司，美国)；B27(Gibco公司，美国)；L-谷氨酰胺(Gibco公司，美国)；青霉素/链霉素(160 万u/100ml)(Sigma公司，美国)；兔抗鼠神经元特异烯醇化酶(武汉博士德公司)；山羊抗兔免疫组化试剂盒(武汉博士德公司)；DAB显色试剂盒(武汉博士德公司)；……