添加扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法的建立与应用

张德福，赵禹宗，付绪磊，张明，仪淑敏，徐永霞，殷喆，李春，励建荣*

1(渤海大学 食品科学与工程学院，辽宁省食品安全重点实验室，生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心，辽宁 锦州，121013)2(军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京，100071)3(渤海大学 数理学院，辽宁 锦州，121013)



添加扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法的建立与应用

张德福1, 2，赵禹宗1，付绪磊1，张明1，仪淑敏1，徐永霞1，殷喆2，李春3，励建荣1*

1(渤海大学 食品科学与工程学院，辽宁省食品安全重点实验室，生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心，辽宁 锦州，121013)2(军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京，100071)3(渤海大学 数理学院，辽宁 锦州，121013)

以单增李斯特菌inlA基因为靶基因，设计一对特异性引物，以16S rRNA为扩增内标对照，建立了一种含有扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法。优化了PCR反应体系，并对PCR检测方法的特异性、灵敏度、人工污染样品及食品样品检测效果进行了测试。对2株单增李斯特菌、1株英诺克李斯特菌以及19株非李斯特菌菌株进行PCR检测，结果显示，只有2株单增李斯特菌能被检出大小为826 bp的特异性片段，其余20株细菌只能检出1 500 bp的扩增内标片段。灵敏度实验结果显示，基因组DNA和纯培养物的最低检出限分别为1.80×102fg/μL和1.21×102CFU/mL。当人工污染牛乳样品中单增李斯特菌在最低接种量为0.48 CFU/mL时，经8 h增菌培养后可被该方法检出。……