一种简易的甘蔗叶组织PCR模板制备方法

崔学强张树珍冯翠莲

（1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 甘蔗研究中心 农业部热带作物生物技术重点开放实验室，海口 571101；2. 海南大学农学院，海口 570228）

一种简易的甘蔗叶组织PCR模板制备方法

崔学强1，2张树珍2冯翠莲2

（1. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 甘蔗研究中心 农业部热带作物生物技术重点开放实验室，海口 571101；2. 海南大学农学院，海口 570228）

以转基因甘蔗叶片为材料，少量嫩叶经碱并短暂高温处理，再中和，形成裂解混合物。直接以此为模板，转基因甘蔗外源基因bar、KP4、Cry1Ac-2A-gna融合基因及内源基因Shactin基因为靶基因，PCR扩增结果稳定、准确、重复性强，完全可以达到常规CTAB法提取的DNA扩增效果。用此方法制备的模板室温下2周之内，4℃、-20℃下一个月之内结果不变。经多种外源基因PCR反应的反复验证，证实了这种方法在转基因甘蔗检测中的广泛适用性。该方法快速制备PCR模板，无需DNA提取过程，具有使用样品量少，成本低、简便、快捷等优点。

甘蔗；碱裂解；中和；PCR模板；多重PCR

甘蔗（Saccharum officinarum L.）是世界上一种重要的糖料作物和能源作物。培育高产、高糖、高抗的甘蔗新品种一直是甘蔗育种的主要目标。随着分子生物学的快速发展，转基因技术已成为甘蔗育种的重要方法。该技术通过将特定的基因导入甘蔗中，不仅可以使甘蔗的产量和品质性状得以提高，还能缩短育种的年限和周期［1］。目前，对转基因甘蔗植株的初步检测，国内外的实验室及检测部门运用最广泛的是PCR技术，该方法简便快捷，灵敏度高［2，3］。……