两阶段温度控制策略以及助剂促进淀粉分支酶的胞外表达

王驰，李柱，李才明,2,3，顾正彪,2,3*，洪雁,2,3，程力,2,3，李兆丰,2,3*

1(江南大学 食品学院，江苏 无锡，214122)　2(江南大学，食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡，214122)　3(江南大学，食品安全与质量控制协同创新中心，江苏 无锡，214122)



两阶段温度控制策略以及助剂促进淀粉分支酶的胞外表达

王驰1，李柱1，李才明1,2,3，顾正彪1,2,3*，洪雁1,2,3，程力1,2,3，李兆丰1,2,3*

1(江南大学 食品学院，江苏 无锡，214122)2(江南大学，食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡，214122)3(江南大学，食品安全与质量控制协同创新中心，江苏 无锡，214122)

为了促进重组淀粉分支酶在枯草芽孢杆菌(BacillussubtilisWB600)中的胞外表达，对重组淀粉分支酶在摇瓶水平上进行了发酵优化。首先，以胞外酶活力为指标，先后考察了初始培养基、pH、培养温度和培养时间4种因素对胞外表达的影响；然后，通过两阶段温度策略和助剂的添加进一步提高胞外表达水平。结果表明，当发酵培养基为TB、pH为7.5时，25 ℃培养24 h后胞外酶活力达到19.9 U/mL；同时，菌体生长最适温度和酶分泌的最适温度是不一致的，通过两阶段温度控制策略(即0～12 h控制温度30 ℃，12 h后温度调至25 ℃)，胞外酶活力与单一温度条件下的最高水平(25 ℃)相比提高了1.4倍，达到了47.1 U/mL；在此基础上，进一步添加0.05%的吐温-80，将胞外酶活进一步提高40%，达到65.8 U/mL。

淀粉分支酶；胞外表达；两阶段温度控制策略；发酵优化

近年来，改性淀粉研究成为热点[1-3]，而且更加侧重其构效关系的研究[4-6]。通常人们采用物理、化学和酶法对淀粉进行改性，其中酶法改性较物理、化学法更加温和。

淀粉分支酶(Starch Branching Enzyme，SBE)是一种……