“一锅法”生物转化富马酸制备L-天冬酰胺

张奇，姜增妍，张露，马玉岳，徐友强，裴疆森，程池*

1(中国食品发酵工业研究院，中国工业微生物菌种保藏管理中心，北京，100015)　2(山东省富马酸生物转化工程技术研究中心，山东 烟台，265709)



“一锅法”生物转化富马酸制备L-天冬酰胺

张奇1，姜增妍2，张露1，马玉岳2，徐友强1，裴疆森1，程池1*

1(中国食品发酵工业研究院，中国工业微生物菌种保藏管理中心，北京，100015)2(山东省富马酸生物转化工程技术研究中心，山东 烟台，265709)

L-天冬酰胺广泛应用于食品、医药、化工合成和微生物培养等领域。目前工业上主要依靠化学合成和直接提取方法制备。该研究首次采用双酶催化富马酸“一锅法”制备L-天冬酰胺。克隆来源于大肠埃希氏菌JM109的天冬酰胺合成酶A基因asnA，并于产L-天冬氨酸酶的E.coliCICC 11022S中表达，表达的蛋白分子质量约为37 kDa，与预期大小相符，比酶活力为1443.7 U/g。利用构建的工程菌E.coliCICC 11022S/pET28a(+)-asnA全细胞高密度催化富马酸生产L-天冬酰胺，以高效液相色谱法及PITC柱前衍生-高效液相法检测底物、中间产物和终产物，转化10 h，富马酸转化率为94.7%，L-天冬酰胺产量可达125.1g/L，生产速率为12.51 g/(L·h)。

一锅法；富马酸；天冬酰胺合成酶；L-天冬酰胺；生物转化

L-天冬酰胺(L-asparagine，L-Asn)，又名天门冬酰胺、天门冬素、α-氨基丁二酸一酰胺，于1806年首次被法国化学家LOUIS和PIERRE从芦笋汁中分离，随后陆续在各种动植物体内发现并分离，广泛应用于食品、医药、化工合成和微生物培养等领域[1]。

L-天冬酰胺与糖能进行氨基-羰基反应，形成特殊的香味物质，可作为食品添加剂用于清凉饮料；同时，它也是微生物培养和动物细胞培养重要的添加剂[2]。……