单头肿腿蜂DNA提取方法及多个基因片段PCR反应体系建立

姜嫄 李志强 吴晓云等

摘要[目的]采用分子生物学技术研究肿腿蜂类天敌昆虫近缘种关系。[方法]利用SDS法和试剂盒法2种方法对8种肿腿蜂的单头个体进行基因组DNA提取。[结果]琼脂糖凝胶电泳结果表明，试剂盒法提取的单头肿腿蜂基因组DNA虽成本较高，但提取总量大、提取成功率高、单位浓度高。且利用试剂盒法提取的基因组DNA进行多个基因片段PCR扩增，均得到正确的扩增产物。[结论]该研究为进一步分析肿腿蜂种类及遗传进化关系奠定基础。

关键词肿腿蜂；DNA提取；基因片段；PCR

中图分类号S476文献标识码A文章编号0517-6611（2016）04-186-04

DNA Extraction Method of Sclerodermus and Establishment of Gene Segment PCR Reaction System

JIANG Yuan， LI Zhiqiang， WU Xiaoyun， ZHANG Yinan* et al（Department of Horticulture， Beijing Vocational College of Agriculture， Institute of Biological Control， Beijing 102442）

Abstract[Objective] To research the sibling species relationship of natural enemy insects of Sclerodermus. [Method] Genome DNA extraction of eight species of Sclerodermus was carried out by SDS method and kit method. [Result] Results of agarose gel electrophoresis showed that genome DNA extraction costed relatively high by kit method with the characteristics of large extraction amount， high successful extraction rate and high concentration per unit milliliter. PCR amplification of multiple genes could obtain correct products. [Conclusion] This research provides basis for the further analysis of the types and genetic evolution of Sclerodermus.

Key wordsSclerodermus； DNA extraction； Gene sequences；PCR

腫腿蜂（Sclerodermus）是用于蛀干害虫生物防治的一类重要寄生性天敌昆虫，目前我国已发现多种具有生物防治应用潜能的肿腿蜂，其中管氏肿腿蜂（S.guani）、川硬皮肿腿蜂（S.sichuanensis）和白蜡吉丁肿腿蜂（S.pupariae）已有较多的研究和应用[1-11]。研究表明，用松脊吉丁肿腿蜂寄生马尾松木段中的松褐天牛，其寄生率较高[12]。苹小吉丁肿腿蜂和落叶松吉丁肿腿蜂被用来防治新疆苹小吉丁，具有一定的防治成果[13]。昆虫分子标记技术的不断发展，为肿腿蜂的分子鉴定提供了研究基础。然而，肿腿蜂单头个体体积较小，雌蜂体长3～4 mm，如何提取单头肿腿蜂的基因组DNA成为首要解决的问题。不同肿腿蜂在形态上十分相近，很难鉴别，利用分子生物学手段对不同寄主肿腿蜂的分子鉴定研究，有利于生物防治过程中有针对性地释放天敌，从而达到更好的控制效果。因此，笔者参考小型昆虫和寄生蜂的DNA提取方法[14-16]，对我国已发表的种和北京农业职业学院生物防治研究所采集保存的肿腿蜂进行基因序列研究，以明确其特定基因的异同，为确定其亲缘关系、明确种类奠定基础。……