HSP70及Ezrin蛋白表达变化对人成骨肉瘤MG63细胞凋亡和增殖的影响

马国涛，孙晓茹

(1平顶山市第一人民医院，河南平顶山467000；2平顶山市中医院)



HSP70及Ezrin蛋白表达变化对人成骨肉瘤MG63细胞凋亡和增殖的影响

马国涛1，孙晓茹2

(1平顶山市第一人民医院，河南平顶山467000；2平顶山市中医院)

目的分析人成骨肉瘤MG63细胞中热休克蛋白70(HSP70)、细胞骨架蛋白(Ezrin)的表达对该细胞凋亡和增殖的影响。方法 首先在有双启动子的质粒载体pGFP-V-RS中构建能够表达HSP70和Ezrin蛋白shRNA的载体并重组质粒，将质粒转染入MG63细胞，分为联合表达组、单纯shRNA组、空白载体组，筛选稳定表达细胞培养增殖，采用RT-PCR及Western blotting法检测这两种蛋白基因表达情况与蛋白水平；Western blotting法检测凋亡相关蛋白,使用流式细胞术及噻唑蓝比色法分别检测第1、3、5、7天细胞凋亡及增殖率。结果 联合表达组Ezrin mRNA及Ezrin蛋白合成量低于空白载体组和单纯shRNA组，HSP70 mRNA及HSP70蛋白合成量高于空白载体组和单纯shRNA组(P均<0.01)，HSP70和Ezrin联合表达的MG63细胞构建成功。低表达Ezrin和高表达HSP70的载体质粒构建成功。联合表达组MG63细胞凋亡率(23.94%±0.48%)较空白载体组(10.96%±0.25%)高(P<0.01)，增殖速度(308.67%±2.91%)较单纯shRNA组(394.80%±2.63%)慢(P<0.01)；与空白载体组比较，单纯shRNA组、联合表达组第3、5、7天细胞增殖率降低，抑制率升高(P均<0.01)。与单纯shRNA组比较，联合表达组第3、5、7天细胞增殖率低，抑制率低(P均<0.01)。结论 高表达的HSP70和低表达的Ezrin在促进骨肉瘤细胞凋亡的同时减缓其增长速度。

骨肉瘤细胞；热休克蛋白质70；Ezrin蛋白；shRNA

骨肉瘤是一种多发于年轻人群的具有较高转移率和复发率的恶性肿瘤，近80%的患者在诊断明确时已发生癌细胞转移，在较新的放化疗治疗手段下，其5年存活率仍在一半以下，而治疗后约有三分之一的患者3年后再次被检出癌细胞[1]，所以，研究骨肉瘤细胞的凋亡和增殖机制，发现其干扰新方法对于临床治疗非常有意义。Ezrin蛋白存在于细胞表面，作为连接和受体蛋白存在，通过多种信号途径调节癌细胞凋亡、增殖、浸润、转移[2]。系统性分析表明，骨肉瘤细胞中Ezrin蛋白过表达会导致患者5年生存率显著降低[3]。……