厨房PM2.5对于诱发致敏小鼠肺部炎症的影响

侯德音 谭序芊 柴寅初 Dr.Bob Yang

（南京市金陵中学 江苏南京 210014）

厨房PM2.5对于诱发致敏小鼠肺部炎症的影响

侯德音 谭序芊 柴寅初 Dr.Bob Yang

（南京市金陵中学 江苏南京 210014）

以小鼠为模型研究日常烹饪时家庭厨房所产生的PM2.5对于诱发致敏小鼠肺部炎症的影响，通过对小鼠肺部6种（TNF-α，IL-1β，IL-6，IL8，IL13，以及IFN-γ，产生炎症相关的基因表达量的检测，对比实验组和对照组的表达差异，可以明显发现实验组小鼠炎症相关基因的表达量显著增高。

厨房PM2.5 Real-time PCR 炎症 基因

1 材料与方法

C57BL/6小鼠，70只雌性，体重18-22克，购自南京大学模式动物研究所。M-MLV Transcriptase（Cat No：M1705）和GoTaq qPCR Master Mix（Cat No：A6001，购自Promega Corporation，SunShineBio Total RNA Extraction Reagent（Cat No：SN114，购自南京生兴生物技术有限公司，FUT甲醛检测仪PM2.5检测仪五合一甲醛检测器粉尘检测仪器购自山雨电子产品，协同舒克贝塔仓鼠粮食实验小鼠饲料，20千克，购自江苏协同生物

2 实验方法

2.1动物模型建立：将70只小鼠分10笼，每笼7只，并标记1-10号笼。1-5笼为实验组，每天暴露在厨房PM2.5下，其余时间饲养在实验室；6-10笼为对照组，饲养在实验室内。实验组小鼠被暴露在油烟下的时间为一天两次。早上暴露时间大约在10：30-11：00之间，模拟家庭做午饭时产生的油烟；下午暴露时间大约在16：00-16：30之间，模拟家庭做晚饭时产生的油烟。

2.2 从实验开始的第一天起，下午户外实验结束后，每隔1天解剖小鼠。 从1-5笼和6-10笼中分别取出两只，共4只，取出肺部组织。

2.3 RNA提取：按照实验操作说明书提取肺部组织的总RNA，并测定O D值。

2.4 反转录实验：在总体积反应20ul反应液中含有Total RNA（约2ug，、Oligo dT Primer1uL（500μg/ml，、Random 6 mers1uL（500μg/ml，、RNase Inhibitor 0.5uL（40U/μL，、dNTPs （10mM）1uL、M-MLV Transcriptase 1uL（200U，和M-MLV 5X Reaction Buffer 4uL，最后补RNase-Free water至反应体积为20ul。反应程序：65℃保温5 min，然后冰浴5 min； 先在37℃保温1 hr，然后70℃保温15min；……