HIV-1逆转录酶的表达、纯化及晶体生长条件的摸索

姜彦静

（武汉大学生命科学学院 湖北武汉 430072）

HIV-1逆转录酶的表达、纯化及晶体生长条件的摸索

姜彦静

（武汉大学生命科学学院 湖北武汉 430072）

利用大肠杆菌原核表达系统对HIV-1 RT蛋白进行表达，纯化以及晶体生长条件的搜索。以PNL4-3为模板，通过聚合酶链式反应扩增出HIV-1 RT蛋白的基因，将扩增出的目的基因克隆到表达载体Pet-duet中，构建HIV-1逆转录酶的重组质粒，重组质粒转化表达菌株BL21（DE3）进行诱导表达。HIV-1逆转录酶主要以可溶形式表达，经亲和柱Ni2+-NTA，阴离子交换柱MONOQ，分子筛进行纯化后获得了蛋白，其纯度达到85%-90%，基本满足了晶体生长条件的要求。对晶体生长条件行了初筛，最终并获得了HIV-1 RT的蛋白晶体，为蛋白晶体的优化以及蛋白结构的研究奠定了基础。

HIV-1 原核表达 纯化 晶体生长

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染所诱发引起的获得性免疫缺陷综合症（Acquired immunodeficiency syndrome），它能够破坏人体的免疫系统，是一种严重害人类健康的全球性的慢性的染病疾病，截至2015年，全球200多个国家和地区，约3600多万人，已遭受艾滋病的感染。目前对抗艾滋病已经引起了全世界的广泛关注，虽然在近些年也取得了一定的进展，但是，目前仍然没有治疗艾滋病的有效手段。［1-2］HIV-1逆转录酶是病毒复制过程中一个重要的酶，因此作为抗艾滋病药物的主要靶标［3］。

HIV-1逆转录酶为不对称的异源二聚体，包括P66和P51两个亚基，P51亚基是由P66亚基裂解得到的［4］。P66亚基有560个氨基酸组成，P51亚基有440个氨基酸组成。两个亚基之间有着较强的相互作用，当两者以1：1的摩尔比进行正确折叠才能组装成HIV-1RT。……