适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳优化体系的建立

王 强，王 娟，李 宁，唐亚萍，杨 涛，王柏柯，杨生保，帕提古丽，余庆辉

(1.新疆农业科学院园艺作物研究所/新疆园艺作物生物技术与分子育种重点实验室，乌鲁木齐　830091；2. 新疆农业科学院经济作物研究所，乌鲁木齐　830091)



适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳优化体系的建立

王 强1，王 娟2，李 宁1，唐亚萍1，杨 涛1，王柏柯1，杨生保1，帕提古丽1，余庆辉1

(1.新疆农业科学院园艺作物研究所/新疆园艺作物生物技术与分子育种重点实验室，乌鲁木齐830091；2. 新疆农业科学院经济作物研究所，乌鲁木齐830091)

【目的】建立适于番茄叶片蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)技术，为开展番茄蛋白质组学研究奠定技术基础。【方法】对番茄叶片蛋白质提取方法、蛋白质裂解液、上样量、胶条pH范围等关键步骤进行优化。【结果】采用三氯乙酸/丙酮法提取番茄叶片总蛋白质，含有7 mol/L尿素，2 mol/L硫脲，4% CHAPS，30 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)裂解缓冲液，上样量为100 mg，以pH 4～7、18 cm的IPG 胶条在12%SDS-PAGE凝胶浓度下进行双向电泳，得到了蛋白点均匀分布、低峰度蛋白点较为清晰，蛋白点数目多且分辨率高的2-DE图谱。【结论】建立了一套适于番茄叶片蛋白质分析的双向电泳技术体系，为下一步在蛋白组学水平上分析番茄逆境胁迫等相关蛋白提供了技术支持。

番茄叶片；蛋白质组；双向电泳(2-DE)

0　引 言

【研究意义】蛋白质组学是后基因组时代研究生物学功能的重要组学，双向电泳技术(2- DE) 已经成为了蛋白组学研究的核心技术之一，而双向电泳技术涉及的环节较多，样品制备中植物组织中存在影响双向电泳的物质(如核酸、多糖和脂类等生物大分子以及盐类) 会阻塞凝胶孔径，盐浓度过高会使等电聚焦的电压降低，甚至损坏IPG 胶条[1]。……