藤黄微球菌rpf基因的克隆表达及其结构预测

张秀敏，景凤霞，王海强，赵若玮，张艳芬

(1.河北大学 生命科学学院，河北 保定　071002；2.河北大学 科学技术处，河北 保定　071002)



藤黄微球菌rpf基因的克隆表达及其结构预测

张秀敏1，景凤霞1，王海强1，赵若玮1，张艳芬2

(1.河北大学 生命科学学院，河北 保定071002；2.河北大学 科学技术处，河北 保定071002)

为了了解藤黄微球菌(Micrococcusluteus)复苏促进因子(resuscitation-promoting factor，Rpf)的性质，用自行设计的引物，以藤黄微球菌ACCC41016基因组DNA为模板，扩增rpf基因．随后，构建pET-28a(+)-rpf表达载体，在EscherichiacoliBL21(DE3)中进行IPTG诱导表达，并以克隆测得的rpf基因核酸序列为基础，对Rpf蛋白的氨基酸序列、疏水性、信号肽、磷酸化位点、三级结构以及结构功能域进行生物信息学预测分析．结果表明：该rpf基因与文献报道的藤黄微球菌IAM 14879rpf基因核苷酸序列一致性为69.72%；该rpf基因所编码蛋白的氨基酸序列与文献报道的Rpf蛋白氨基酸序列一致性为63.44%．在E.coliBL21(DE3)中成功表达了Rpf目的蛋白．初步了解了Rpf蛋白的理化性质及生物学功能．解释了Rpf蛋白能够使细菌复苏并促进其生长的理论，为进一步探讨Rpf蛋白的作用机理奠定了基础．

藤黄微球菌；复苏促进因子(Rpf)；克隆；表达；结构预测

1998 年，Mukamolova等[1]从藤黄微球菌(Micrococcusluteus)的培养液中发现一种能够促进细菌复苏的物质．他们将培养液的上清液灭菌处理后，加入到处于活的非可培养状态(VBNC)的细菌培养液中，发现这些细菌能够快速复苏和生长，将培养液纯化后发现了复苏促进因子(resuscitation-promoting factor，Rpf)，命名为Rpf[2]．

Rpf是首次被发现的能促进休眠态的细菌复活同时促进其生长的因子，该因子是一种分泌蛋白……