生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法

张红蕾，徐志栋，李　玮,2*，杨瑜涛，杜　洁，韩孟楠，王烁康

(1.河北大学　化学与环境科学学院，河北　保定　071002；2.河北博伦特药业有限公司，河北　石家庄　052263)



生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法

张红蕾1，徐志栋1，李玮1,2*，杨瑜涛1，杜洁1，韩孟楠1，王烁康1

(1.河北大学化学与环境科学学院，河北保定071002；2.河北博伦特药业有限公司，河北石家庄052263)

以芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)为柱前衍生剂，四硼酸钠为缓冲溶液，建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定微生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法。优化了衍生反应条件，当衍生反应体系中水和乙腈的比例为66∶34，pH值为9.9时衍生效果最佳。采用Agilent Extend C-18柱进行分离，以0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈作为流动相，梯度洗脱，检测波长263 nm。L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸均在0.01～5.00 mg/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999，检出限为5.00～7.00 ng/L，不同浓度下的平均回收率分别为98.9%～102%和97.9%～100%。该方法重现性好，精密度高，为定量分析微生物发酵液中的L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸提供了有效方法。

柱前衍生；反相高效液相色谱；反式-4-羟基-L-脯氨酸；L-脯氨酸；微生物转化

反式-4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-Hydroxy-L-proline，trans-Hyp)为亚氨基酸，是L-脯氨酸 (L-Pro) 羟基化后的产物，易于衍生，药理活性多样[1-2]，可用于新一代培南类抗生素[3]、抗肿瘤药[4]、抗高血压药[5]及新型胃药[6]等多种新创制药物的合成。由于具有抗氧化、抗辐射的作用，该物质在化妆品领域也有重要应用[7]。

目前，反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产方法主要有生物提取法和生物酶催化转化法[8-11]。……