高效液相色谱法对降脂通便胶囊中大黄有效成分测定

孟晓丹

（河南省洛阳市第三人民医院药剂科，洛阳471000）

高效液相色谱法对降脂通便胶囊中大黄有效成分测定

孟晓丹

（河南省洛阳市第三人民医院药剂科，洛阳471000）

目的对降脂通便胶囊中大黄有效成分进行含量测定。方法应用高效液相色谱法测定本院制剂降脂通便胶囊有效成分大黄酚及大黄素的含量。结果大黄素的回归方程为A1=3685.0C1-2.6838（r=0.9998），线性范围为0.0129 μg～0.226 μg；大黄酚的回归方程为A2=5695.6C2-5.2986（r=0.9998），线性范围为0.0173 μg～0.302 μg。结论高效液相色谱（HPLC）法用于我院制剂降脂通便胶囊的含量测定控制。该方法简便易行，重现性好。可用于测定降脂通便胶囊中的大黄素和大黄酚的含量。

降脂通便胶囊；高效液相色谱；大黄素；大黄酚；含量测定

降脂通便胶囊是本院制剂室生产主要成分为：大黄、薏仁、山楂、枸杞子、红枣、水蛭等，功能主治：补肾、降脂、袪浊、润肠通便。血脂、血压、三酸甘油脂高者；身体臃肿、肥胖、易疲劳者；常年便秘、腹胀者；皮肤干涩、暗疮、出现色斑者等。大黄为本方的君药之一，其主要有效成分为大黄酚和大黄素作为本品质量测定的控制标准［1］。本实验参考相关文献，建立了高效液相色谱法测定本院制剂降脂通便胶囊中大黄酚、大黄素含量的方法，其结果显示灵敏度高、分离效果好、准确度高等多项优点。

1 实验方法

1.1 仪器与试药仪器：电子天平（PrecisaSA-125A）、LC-100上海伍丰高效液相色谱仪，SH-AC青岛色谱柱；对照品：大黄酚、大黄素均购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号分别是110756-200510，110796-200513。供试品：降脂通便胶囊，由洛阳市第三人民医院制剂室提供。试剂：甲醇、磷酸等流动相所用试剂均为色谱纯，其余均为分析纯，水用重蒸馏水。

1.2 对照品溶液制备精密称取大黄素、大黄酚对照品各适量，加入甲醇制成每1 ml含大黄酚8 μg、大黄素4μg的混合溶液。

1.3 供试品溶液制备取样品2 g，精密称量，置入具塞锥形瓶中，加入精密称量的甲醇50 ml，密塞，称重，超声处理30分钟后冷却，再次称重，再用甲醇补足消耗的重量，摇匀过滤，精密量取续滤液25 ml，置入圆底蒸馏瓶蒸干，残渣再加水20 ml、盐酸2 ml、氯仿20 ml，然后加热回流30分钟，冷却后分取氯仿层，水层则用氯仿振摇法提取，每次10 ml，共3次，然后再合并氯仿液蒸干，剩余残渣再次加甲醇使其溶解，然后转移到25 ml量瓶中，加甲醇至刻度处，摇匀即得。

1.4 阴性对照溶液制备取缺大黄的阴性样品适量，按供试品溶液的制法制备阴性对照溶液。

1.5 干扰试验取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各按上述条件测定。样品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无此峰，说明降脂通便胶囊的其它成分对大黄素和大黄酚的测定并无干扰，证实本测定法切实可行。

1.6 精密度试验精密量取样品1份，按供试品溶液制备法制备，按上述色谱条件测定，连续重复进样共6次，得出大黄酚峰面积RSD值是0.5%（n=6）、大黄素峰面积RSD值是1.2%（n=6）。

1.7 重复性试验同一样品精密称取6份，按供试品溶液制备法制备，按上述色谱条件测定并精密计算其含量，结果：大黄酚和大黄素的平均含量为0.4 mg/粒，RSD= 1.5%（n=6）。

1.8 稳定性试验精密称取1份样品，按供试品溶液制备法制备，按上述色谱条件测定，隔2 h进样1次，测峰面积并精密计算，结果：大黄酚24 h内的RSD为0.9%（n=12），大黄素24 h内的RSD为1.4%（n=12），显示样品溶液测定结果24 h内稳定。

1.9 回收率试验精密量取已知含量的降脂通便胶囊内容物粉末每份0.5 g，共取6份，分别加入大黄酚对照品溶液（0.0252 mg/ml）7 ml、大黄素对照品溶液（0.01068 mg/ml）12 ml。按上述色谱条件测定并计算回收率，具体结果见表1。

表1 降脂通便胶囊大黄素加样回收率试验结果

样品加样回收试验结果表明，回收率在95～105%之间，RSD＜3%，表明本方法回收率完全符合含量测定要求。

1.10 降脂通便胶囊中大黄素、大黄酚含量测定取降脂通便胶囊10批，依法测定其中大黄素、大黄酚之含量，每批均测定2次，具体结果见表2。

表2 降脂通便胶囊中大黄素大黄酚含量测定结果

根据10批样品总测定结果，参照《中国药典》2000版一部大黄药材含量测定项下大黄素、大黄酚总量的限度［2］，因考虑其中药材来源不同以及制剂过程中的损失等，将其含量测定限度定为上述10批样品平均含量的70%，即0.929 mg/g×70%=0.6503 mg/g，每粒按0.4 g计，则0.6503 mg/g×0.4 g/粒=0.260 mg/粒。故降脂通便胶囊中所含大黄以大黄酚（C15H10O4）和大黄素（C15H10O5）总量计算，不得少于0.260 mg。

2 讨论

本院制剂降脂通便胶囊处方中主药大黄、薏仁、山楂等有补益肝肾、降脂润肠之效，其主要有效成分大黄酚、大黄素含量相对较高，故选择大黄酚、大黄素的含量测定作为观察指标。因大黄、薏仁、枸杞子、红枣中的降脂物质蒽醌类化合物用乙醇加热回流提取法来提取更为充分，故本实验将此几种物质用乙醇加热回流法进行提取；枸杞子、山楂用醇提法才能提取出有效降脂成分；黄连与含蒽醌类化合物的药材共煎会影响所含生物碱成份的含量，故本实验将黄连采取另外提取的方法。在预试验中，用HPLC法分别对2种制备工艺制出的样品进行含量测定，除山楂醇提法外其余方法测出的大黄酚、大黄素含量远低于醇提工艺，故而制备工艺中选择用醇提法来进行提取。采用HPLC法测定制剂中大黄素、大黄酚的含量时，经过多次实验，发现大黄素、大黄酚色谱峰均分离更好，阴性对照完全无干扰，其试验结果精密准确而可靠，理论塔板数相对较高，所以本实验可作为本院制剂降脂通便胶囊的质量控制方法。

［1］张国用.抗肿瘤中药的作用机制研究［J］.中国中医药现代远程教育，2012（2）：158-159.

［2］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典一部［M］.北京：化学工业出版社，2005：17-328.

Determination on Effective Components of Rhubarb in Jiangzhi Tongbian Capsule by High Performance Liquid Chromatography

MENG Xiaodan
Department of Pharmacy，Luoyang Third People's Hospital，Henan Province，Luoyang 471000，China

Objective To determine the content of effective components of Rhubarb in Jiangzhi Tongbian capsule.Methods The high performance liquid chromatography（HPLC）was used to determine the effective components of rhubarb and emodin in our hospital. Results The regression equation of emodin was A1=3685.0C1-2.6838（r=0.9998），the linear range was 0.0129 mu g to 0.226 mu g，the regression equation was A2=5695.6C2-5.2986（r=0.9998），and the linear range was 0.0173 mu g to 0.302 Mu G.Conclusion The HPLC was used for the determination of the content of the capsule in the preparation of our hospital.This method is simple and easy to operate，and has good reproducibility.It can be used to determine the content of emodin and rhubarb in Jiangzhi Tongbian capsule.

Jiangzhi Tongbian capsule；high performance liquid chromatography；emodin；rhubarb；content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.20.064

1672-2779（2016）-20-0140-02

杨杰 本文校对：张松歌

2016-09-05）