抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

杨国平，刁有祥，赵丹丹，陈　浩，提金凤，张　璐，张　英，李川川

(山东农业大学 动物科技学院，山东 泰安 271017)



抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

杨国平，刁有祥，赵丹丹，陈浩，提金凤，张璐，张英，李川川

(山东农业大学 动物科技学院，山东 泰安 271017)

【目的】 制备抗鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)NS5蛋白的单克隆抗体。【方法】 将实验室保存的PET28a-NS5载体转化入Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达，利用纯化的鸭坦布苏病毒NS5蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠，应用淋巴瘤细胞杂交技术结合有限稀释法制备单抗，并对单抗的特异性、反应性及其抗原表位和亚类进行鉴定。【结果】 筛选获得2株稳定分泌针对DTMUV 的NS5蛋白单抗的杂交瘤细胞，分别命名为A4D1和B4B8。此2株杂交瘤细胞诱导BALB/c小鼠的抗体效价均可达到1∶64 000。间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测结果表明，所获细胞分泌的抗体能与DTMUV及纯化的NS5蛋白发生特异性反应。经鉴定2株单抗的亚类均为IgG1型，通过叠加ELISA方法，初步判定2株单抗识别不同的抗原表位。【结论】 成功获得了抗鸭坦布苏病毒NS5蛋白的单克隆抗体,为研究NS5蛋白的功能奠定了基础。

鸭坦布苏病毒；NS5蛋白；单克隆抗体

2010年春夏之交，在我国江浙和山东等地区的鸭群中爆发了一种以产蛋率大幅下降、生长发育迟缓、卵巢出血为主要特征的急性传染病，之后其迅速传播到福建、江西、安徽、河南和河北等地区，给养鸭业造成了严重的经济损失[1-4]。经病毒分离鉴定证明，该病是由黄病毒科、黄病毒属、恩塔亚病毒群的坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)引起的[5-7]。……