羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立

霍宁宁，朱伟英，高　洋，杨雯昱，岳进华，赵燕清，陈德坤

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 712100)



羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立

霍宁宁，朱伟英，高洋，杨雯昱，岳进华，赵燕清，陈德坤

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 712100)

【目的】 建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】 分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板，用脱脂奶粉封闭酶标板，设置封闭时间分别为1.0，1.5和2 h，再用不同稀释度的血清(1∶100，1∶200，1∶400和1∶800)与之反应，以此优化间接ELISA反应条件，确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察，并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】 选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原，最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08，血清的最佳稀释度为1∶400，封闭时间为2 h，阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清，羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应；组内，组间变异系数<10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】 成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法，该方法特异性强、重复性好，可用于临床诊断和批量血清学检测。

羊干酪性淋巴结炎；伪结核棒状杆菌；间接酶联免疫吸附试验

羊干酪性淋巴结炎(Caseous lymphadenitis，CLA)，又称羊伪结核病，是由伪结核棒状杆菌(Corynebacteriumpseudotuberculosis，C.p)引起的一种山羊和绵羊的慢性人兽共患病，在全世界养羊区域广泛分布。该病在临床上有体表型、内脏型、混合型3种表现形式，体表型以体表淋巴结(腮腺淋巴结、颌下淋巴结等)形成脓胞为主要特征，内脏型在内脏器官和纵膈淋巴结形成脓肿且伴随严重的渐行性消瘦，内脏型一般在体表无脓胞症状。……