浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳、化痰及平喘活性研究

王翰华，杨晓春，崔明超

浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳、化痰及平喘活性研究

王翰华1，杨晓春2，崔明超1

目的考察浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳、化痰及平喘活性。方法分别采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸橼酸引咳法研究浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳活性；小鼠气管酚红排泌法研究化痰活性；豚鼠整体动物引喘法研究平喘活性。结果浙贝母叶醇提物可明显延长小鼠和豚鼠的咳嗽潜伏期并减少咳嗽次数，显著增加小鼠呼吸道黏膜酚红的排泌量，显著延长豚鼠哮喘潜伏期（均P＜0.05）；浙贝母花醇提物可明显延长小鼠和豚鼠的咳嗽潜伏期并减少咳嗽次数，显著增加小鼠呼吸道黏膜酚红的排泌量（均P＜0.05），但不能延长豚鼠哮喘潜伏期（P＞0.05）。结论浙贝母叶醇提物具有明显的止咳、化痰及平喘活性；浙贝母花醇提物具有明显的止咳、化痰活性，但现有剂量下，没有平喘活性。

浙贝母；叶子；花；植物提取物；止咳；化痰；平喘

浙贝母为百合科植物浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鳞茎［1］，是道地药材“浙八味”之一，以宁波鄞州、金华磐安为主产区。现代药理学研究表明，浙贝母具有镇咳、祛痰、松弛平滑肌、镇痛抗炎、降压、活血化瘀、溶石、抗溃疡、止泻、抗菌、抗肿瘤等多种活性［2］。目前，对浙贝母鳞茎部分的研究已经较为深入而全面［3］，但有关浙贝母地上部分的研究还相对匮乏。本实验采用动物模型观察浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳、化痰、平喘活性，为进一步开发利用浙贝母地上部分提供科学依据和参考。

1 材料与方法

1.1 仪器JP-300B型中药粉碎机（永康市久品工贸有限公司）；DHG-9075型鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；402AI型超声雾化器［江苏鱼跃医疗设备股份有限公司，苏食药监械（准）字2007第2230016号］；RE-52型旋转蒸发仪（上海之信仪器有限公司）；BS124S型电子分析天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司］。

1.2 药材与试剂浙贝母叶与浙贝母花均采自宁波市鄞州区章水镇章村，经我校中药学院杨雄志教授鉴定，为百合科浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.的叶和花；蜜炼川贝枇杷膏（广州潘高寿药业股份有限公司，批号:140823）；氯化乙酰胆碱、磷酸组胺（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。所用试剂均为分析纯。

1.3 醇提物的制备取浙贝母叶粉末1 000 g，加10倍量95%乙醇，浸渍2 h，80℃回流提取2.5 h，过滤，重复2次，合并滤液，浓缩，即得。同法制得浙贝母花醇提物。

1.4 实验动物SPF级昆明种小鼠160只，雌雄各半，体质量18～22 g；SPF级豚鼠160只，雌雄兼用，体质量180～200 g。均购于浙江大学实验动物中心，实验动物许可证号:SYXK（浙）2012-0178。

1.5 小鼠氨水引咳实验将昆明种小鼠进行预实验［4］，待小鼠稳定3 d后，取合格小鼠80只，雌雄各半，随机数字表法分为8组，每组10只，分别为空白对照组（生理盐水）、浙贝母叶醇提物高剂量组（4 g·kg-1）、浙贝母叶醇提物中剂量组（2 g·kg-1）、浙贝母叶醇提物低剂量组（1 g·kg-1）、浙贝母花醇提物高剂量组（4 g·kg-1）、浙贝母花醇提物中剂量组（2 g·kg-1）、浙贝母花醇提物低剂量组（1 g·kg-1）和蜜炼川贝枇杷膏阳性对照组（4.8 g·kg-1）。均灌胃给药，剂量为0.02 mL·g-1，连续7 d，于末次给药1 h后，将小鼠置于自制密闭玻璃容器内，超声雾化喷入氨水，20 s后立即取出小鼠，记录小鼠咳嗽潜伏期和3 min内咳嗽次数。

1.6 豚鼠枸橼酸引咳实验将豚鼠进行预实验［4］，筛选出合格豚鼠80只，分组及干预方式同1.5。于末次给药1 h后，将豚鼠放入自制密闭玻璃容器内，超声雾化喷入17.5%枸橼酸，30 s后拿出，记录豚鼠咳嗽潜伏时间及5 min内咳嗽次数。

1.7 豚鼠整体动物引喘实验将豚鼠进行预实验［5］，筛选出合格豚鼠80只，分组及干预方式同1.5。于末次给药1 h后，将豚鼠放入自制密闭玻璃容器内，用超声雾化器喷入2%氯化乙酰胆碱与0.1%磷酸组胺等体积混合溶液，15 s后拿出，观察并记录豚鼠哮喘潜伏期。

1.8 小鼠酚红排泌实验取昆明种小鼠80只，雌雄各半，分组及干预方式同1.5。于末次给药30 min后，腹腔注射0.5 mL 0.5%苯酚红溶液，1 h后处死小鼠，分离气管段，加入3 mL生理盐水和1 mol·L-1的氢氧化钠溶液0.1 mL，于546 nm波长处测得吸光度（A），用标准曲线法计算酚红排出量。

2 结果

2.1 各组小鼠氨水引咳实验结果与空白对照组比较，浙贝母叶醇提物高、中、低剂量组，浙贝母花醇提物高、中、低剂量组和蜜炼川贝枇杷膏阳性对照组的小鼠咳嗽潜伏期延长，咳嗽次数减少（P＜0.05）；在相同剂量下，浙贝母叶醇提物对氨水引咳小鼠的止咳作用优于浙贝母花醇提物（P＜0.05），见表1。提示浙贝母叶与浙贝母花醇提物能明显抑制由氨水引起的小鼠咳嗽。

Tab.1Effects of ammonia on cough in mice表1 对小鼠氨水引咳的影响（n=10，x±s）

2.2 各组豚鼠枸橼酸引咳实验结果与空白对照组比较，浙贝母叶醇提物高、中、低剂量组，浙贝母花醇提物高、中、低剂量组和蜜炼川贝枇杷膏阳性对照组的豚鼠咳嗽潜伏期延长，咳嗽次数减少（P＜0.05）；在同样剂量下，浙贝母叶醇提物对枸橼酸引咳豚鼠的止咳作用优于浙贝母花醇提物（P＜0.05），见表2。提示浙贝母叶与浙贝母花醇提物能抑制枸橼酸引起的豚鼠咳嗽。

Tab.2Effects of citric acid on cough in guinea pigs表2 对豚鼠枸橼酸引咳的影响（n=10，x±s）

2.3 各组豚鼠整体动物引喘实验结果与空白对照组比较，浙贝母叶醇提物高、中、低剂量组和蜜炼川贝枇杷膏阳性对照组的哮喘潜伏期显著延长（P＜0.05）。浙贝母花醇提物高、中、低剂量组的哮喘潜伏期与空白对照组比较，差异无统计学意义，见表3。提示浙贝母叶醇提物具有平喘活性，浙贝母花醇提物在现有剂量下，没有平喘活性。

Tab.3Effects of incubation period of asthma in guinea pigs and tracheal phenol red excretion volume in mice表3 对豚鼠哮喘潜伏期及小鼠酚红排泌的影响（n=10，x±s）

2.4 各组小鼠酚红排泌实验结果与空白对照组比较，浙贝母叶醇提物高、中、低剂量组，浙贝母花醇提物高、中、低剂量组和蜜炼川贝枇杷膏阳性对照组中小鼠气管酚红排泌量均显著增加（P＜0.05）；在相同剂量下，浙贝母叶醇提物的化痰作用优于浙贝母花醇提物（P＜0.05），见表3。提示浙贝母叶与浙贝母花醇提物具有一定的化痰作用。

3 讨论

目前，小鼠氨水引咳法、豚鼠枸橼酸引咳法、小鼠酚红排泌法及豚鼠整体动物引喘法分别是用于评价药品止咳、化痰和平喘作用的经典药理模型［4-9］。其原理分别是:通过化学刺激、喷雾吸入氨水和枸橼酸，刺激副交感神经系统，制成咳嗽模型；通过测定小鼠气管中酚红排泌量观察祛痰作用；通过喷雾吸入氯化乙酰胆碱与磷酸组胺的混合溶液，制作豚鼠哮喘模型。本实验结果表明，浙贝母叶醇提物具有明显的止咳、化痰及平喘活性；浙贝母花醇提物具有明显的止咳、化痰活性，但现有剂量下，没有平喘活性；与阳性对照组比较，浙贝母叶与浙贝母花醇提物的止咳化痰活性无明显差异，提示两者的止咳化痰活性较好，具有一定的开发利用价值。

浙贝母叶醇提物的止咳化痰活性明显优于浙贝母花醇提物，可能与贝母叶中贝母素甲和贝母素乙含量较高有关［10-11］。乙醇的溶解范围广泛，因此本实验浙贝母叶与浙贝母花醇提物中包含了除糖类外的绝大部分成分，但并未明确具体的活性部位。今后可筛选其活性部位，并对其作用机制进行深入研究。

另一方面，受需求和供给的影响，浙贝母的价格往往有“大年”、“小年”之分［12］，贝农的利益无法得到切实保障。对浙贝母地上部分的开发利用，有利于浙贝母药用资源的全面开发利用，促进相关功能食品及保健品的开发，对增加贝农的收入大有裨益。

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（2016-04-29收稿2016-06-13修回）

（本文编辑闫娟）

Activity study of the ethanol extract of thunberg fritillary leaf and the ethanol extract of thunberg fritillary flower on relieving cough，abolishing phlegm and relieving asthma

WANG Hanhua1，YANG Xiaochun2，CUI Mingchao1
1 Zhejiang Pharmaceutical College，Ningbo 315100，China；2 Zhejiang University

ObjectiveTo observe the effects of the ethanol extract of thunberg fritillary leaf（EETFL）and the ethanol extract of thunberg fritillary flower（EETFF）on relieving cough，sputum elimination and relieving asthma.MethodsThe cough relieving effects of EETFL and EETFF were studied in mouse cough model caused by ammonia water and in guinea pig cough model caused by citric acid.The sputum elimination effects of EETFL and EETFF were researched by the observation of tracheal phenol red shedding in mice.The asthma relieving effects were tested by spraying method in guinea pigs.ResultsEETFL can obviously inhibit the incubation period and cough frequency of the model mice and guinea pigs induced by ammonia water and citric acid（P＜0.05），and significantly improve the tracheal phenol red excretion volume in mice（P＜0.05），and obviously prolong the incubation period of asthma（P＜0.05）.EETFF can obviously inhibit the incubation period and cough frequency of the model mice and guinea pigs induced by ammonia water and citric acid（P＜0.05），and significantly improve the tracheal phenol red excretion volume in mice（P＜0.05），but EETFF couldn't prolong the incubation period of asthma evidently.ConclusionEETFL has obvious activity of relieving cough，eliminating phlegm and relieving asthma.EETFF has obvious activity of relieving cough and eliminating phlegm，but EETFF has no anti-asthmatic activity under the current dose.

fritillaria thunbergii；plant extracts；flowers；cotyledon；relieving cough；reducing sputum；antiasthma

R932

A

10.11958/20160345

浙江省中医药科技计划项目（2010ZB132）；宁波市自然科学基金项目（2015A610290）

1浙江宁波，浙江医药高等专科学校（邮编315100）；2浙江大学

王翰华（1982），男，讲师，硕士，主要从事中药现代化研究