丹参注射液对急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织ICAM-1表达的影响



丹参注射液对急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织ICAM-1表达的影响

徐文会 杨敏

急性胰腺炎(AP)是外科常见急腹症之一，重症急性胰腺炎(SAP)常伴有全身炎症反应综合征及器官功能衰竭[[1]]，病死率极高。SAP合并的其他脏器损伤中尤以肺损伤为主，主要的致病因子之一是细胞间黏附因子(intercellular adhesion molecule 1, ICAM-1)及其配体中性粒细胞表面抗原(lymphocyte function-associated antigen-1，LFA-1)[[2]]。有研究结果表明，丹参注射液中的水溶性酚酸类有活血化瘀的良好药效[[3]]，不仅在心闭胸闷的疾病中应用，还对多种心血管疾病，肝、肾功能损伤等有良好的治疗效果[[4]]。本研究应用丹参注射液治疗急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠，观察其对ANP引起的肺损伤的治疗作用。

一、材料与方法

1．实验动物及分组：SD大鼠60只购自山西医科大学动物中心，按随机数字法将大鼠分为对照组、ANP组、丹参注射液治疗组(治疗组)，每组20只。ANP组采用胆胰管内逆行注入1%牛磺胆酸钠0.2 ml/kg体重的方法制备ANP模型；治疗组在ANP模型制备前30 min腹腔注射丹参酮溶液25 mg/kg体重；对照组大鼠在开腹后仅触碰与翻动十二指肠及胰腺。ANP组与对照组大鼠在术前30 min腹腔注射等容积生理盐水。术后3、6、12、24 h分批处死大鼠。采取血液标本，分离血浆置-20℃冰箱备用。取胰腺及肺组织。

2．血浆LFA-1水平检测：参考杨学良等[5]报道的方法，应用流式细胞仪检测大鼠血浆LFA-1水平。

3．大鼠肺组织病理学检查及ICAM-1蛋白表达检测：取大鼠左侧肺称湿重，再将其置160℃烘烤48 h，充分脱水直至恒重，再称左肺干重，计算湿重与干重的比值(W/D值)。取右肺置10%甲醛浸泡过夜，常规行病理学检查，并采用免疫组化染色法检测ICAM-1蛋白表达。兔抗大鼠ICAM-1抗体购自武汉博士德公司，工作浓度1∶5，羊抗兔多抗购自上海彩音生物科技公司，工作浓度1∶5。随机选取3个高倍视野，参考刘明东等[6]的方法进行评分。阳性积分=(阳性细胞数/总细胞数)×着色强度。浅黄色为着色强度1分，黄色为2分，深黄至棕色为3分。

二、结果

1．各组大鼠血浆LFA-1水平变化：对照组大鼠血浆LFA-1水平无明显变化。ANP组大鼠血浆LFA-1水平随时间的延长逐渐升高，各时间点均较对照组显著升高，差异均有统计学意义。治疗组血浆LFA-1水平亦随时间的延长逐渐升高，但均显著低于同时间点ANP组，仍显著高于对照组，差异均有统计学意义(表1)。

表1 3组大鼠血浆LFA-1水平的变化

注：与对照组比较，aP<0.05，与ANP组比较，bP<0.05

2．各组大鼠肺组织病理改变及ICAM-1表达的变化：对照组大鼠肺组织无明显病理学改变。ANP组及治疗组大鼠制模后3 h起肺组织出现明显的水肿与充血，6 h起组织间多形核白细胞数量增多，广泛浸润，与血管内皮黏附明显，组织间隔变性增厚，且随时间的延长而加重。

对照组大鼠肺组织ICAM-1表达较少，且随时间的延长无明显变化。ANP组、治疗组大鼠肺组织ICAM-1表达均随时间延长而升高，且均显著高于同时间点对照组，治疗组又显著低于同时间点ANP组，差异均有统计学意义(表2，图1)。

3．各组大鼠肺的W/D值变化：对照组大鼠肺的W/D值无明显变化。ANP组、治疗组大鼠肺的W/D值均随时间延长而升高，且6 h后均显著高于对照组(表3)。

表2 各组大鼠胰腺组织ICAM-1表达

注：与对照组比较，aP<0.05；与ANP组比较，bP<0.05

表3 3组大鼠肺W/D比值的比较

注：与对照组比较，aP<0.05，与ANP组比较，bP<0.05

讨论

肺损伤是SAP的一个主要并发征，其机制主要是胰腺腺泡释放的大量胰酶激活单核细胞吞噬系统，导致中性粒细胞分泌大量细胞因子，产生级联的炎症反应，引发严重的SIRS，造成多器官，尤其是肺脏的损害[[8]。Zhou等[[9]]的研究结果显示，炎症因子浓度的升高往往导致炎症反应与器官损伤的加剧，抑制炎症因子产生可有效改善预后，显著提高患者治愈率。

ICAM-1及其配体LFA-1作为炎性因子可随血流运抵全身，两者结合可产生广泛的黏附聚集，导致毛细血管机械性堵塞，机体微循环障碍，严重影响组织的血液循环及氧气供应，造成不可逆转的损伤。ICAM-1作为一种细胞膜表面的跨膜糖蛋白，在多种细胞，尤其在血管内皮细胞中的表达，对细胞内外间质间和细胞与细胞间的黏附运动起着重要的作用。当其高表达时，大量炎症细胞如白细胞、中性粒细胞等会随之趋附至病变部位，从而引起并加重炎症反应。

图1 大鼠术后3、6、12、24 h对照组(1A～1D)、ANP组(1E～1H)、治疗组(1I～1l)肺组织ICAM-1蛋白表达(免疫组化， ×200)

丹参本身具有活血化瘀的功效，可显著改善人体微循环状态，消除炎症反应，有助于保持超氧化物歧化酶的活性，另外可抑制血小板凝集，抑制器官缺血再灌注对人体的损害，使体内细胞维持相对稳定的状态[[10]]。本研究结果显示，接受丹参注射液腹腔注射的治疗组大鼠血浆LFA-1水平、肺组织病理损伤及ICAM-1蛋白表达均较ANP组显著下降，提示丹参注射液可抑制ANP大鼠体内炎症因子的释放，进而减轻ANP并发的肺损伤。

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[2] 杨学良,王广义,任强. 重症急性胰腺炎时ICAM-1和LFA-1变化及丹参注射液干预的影响[J].中国实验诊断学，2011，15(4)：604-606.DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2011.04.010.

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[5] 杨学良,王广义. 重症急性胰腺炎肺损伤大鼠ICAM-1和LFA-1变化及丹参注射液的干预作用[J].中国老年学杂志，2010,30(8):1108-1110.DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2010.08.038.

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(本文编辑：吕芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2016.05.012

030001 太原，山西医科大学第二医院麻醉科(徐文会)；山西省儿童医院麻醉科(杨敏)

徐文会，Email: 80849969@qq.com

2014-03-22)