营养琼脂培养基制备新方法的建立

廖伟伟 （辽宁省锦州市动物疫病预防控制中心 121000）

营养琼脂培养基制备新方法的建立

廖伟伟 （辽宁省锦州市动物疫病预防控制中心 121000）

为探讨营养琼脂培养基制备新方法。通用的普通营养培养基制备程序分为配料、加热溶解、灭菌、矫正pH、分装、检定、保存等7个步骤。通过实践，笔者发现在这些步骤中，加热溶解和灭菌可以合二为一，提高培养基制备速度，具备9大优点。用两种方法制备出来的培养基平板，进行平行药敏试验，观察新方法制备的培养基质量和使用效果。结果：培养基快速制备方法能够在提高效率的同时，保证培养基的质量，能够运用到实践工作中。

琼脂培养基；制备；新方法；优点；试验

在兽医诊疗工作中，常常需要运用到药敏试验。就锦州市动物疫病预防控制中心禽病门诊为例，天天都有用到培养基平板做药敏试验。由于需要大量的药敏培养基平板，在长期的实践工作中，笔者探索出了新的培养基制备方法。现将试验过程总结如下。

1 材料与方法

1.1 器材与试剂

立式压力蒸汽灭菌器 （YXQ-LS-30SⅡ（，上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品。恒温培养箱 （JKDP.360（，厦门医疗电子仪器厂产品。生物安全柜 （NU-437-400E（，美国Nuaire。试验室pH计 （PHSJ-3F（，上海雷磁精密科学仪器有限公司产品。营养琼脂粉 （批号20151005（，北京奥博星产品。冰箱、250ml生理盐水玻璃瓶 （以下简称玻璃瓶（、棉绳、注射器针头、无菌培养皿、封口塑料膜、天平、250ml量筒、自制药敏片、蒸馏水。

1.2 试验方法

同时用传统方法和新方法各制备10个培养基平板。传统方法制备的培养基平板编号为A，新方法制备的培养基编平板号为B。同时进行大肠杆菌药敏试验。

2 培养基制备新方法

2.1 配料

按照营养琼脂粉说明书给出的比例称量出干粉倒入250ml玻璃瓶中，倒入相应比例的纯化水。然后盖上瓶塞，再用塑料膜包裹整个玻璃瓶瓶口部分，用棉绳绑紧。最后剧烈震荡，充分混合。瓶中的液体不要超过220ml，如果需要的量大，可以多配几瓶。

2.2 加热溶解与灭菌

（1（把玻璃瓶放入立式压力蒸汽灭菌器中。用注射器6号针头扎穿封口膜与瓶塞，针头保留其中，使瓶中压力与蒸汽灭菌器中的压力同步。

（2（高温可破坏培养基的营养成分，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌[1]。在立式压力蒸汽灭菌器中121.3℃灭菌15～20min。这个湿热灭菌的过程包含了传统的培养基加热溶解的步骤。

（3（灭菌15～20min后，灭菌器自动停止加热。这时候拔除电源，让灭菌器自然冷却减压。1～2h后，压力仪表显示为0时可以打开放气阀，排出残余蒸汽，使灭菌器内外压力一致时，带棉布手套取出玻璃瓶，拔除注射器针头。瓶中的培养基已经完全溶解，这时候需要注意反复倒置轻摇玻璃瓶20次，使里面的液态培养基充分均匀透明。

2.3 矫正pH值

培养基配方要求的pH值为灭菌或者消毒后的pH值，即培养基使用前的pH值[2]。把玻璃瓶转移到无菌操作台或者生物安全柜中，缓慢的打开瓶塞，用试验室pH计进行测量，然后用无菌的1mol/L NaOH或1mol/L HCl矫正。

2.4 分装

待矫正后的培养基冷却至50℃左右就可以在无菌操作台或生物安全柜中向培养皿中倾倒培养基了。倒入培养皿中的液态培养基要全部自然覆盖培养皿的底部，厚度为3～5mm。

2.5 检定

每批培养基平板制成后须经检定方可使用，新制成的平板培养基，含水量较多，不利于药敏试验，应将冷却凝固后的平皿倒扣搁置于37℃恒温培养箱中，培养24h。24h后培养基平板没有长菌才可以使用。

2.6 保存

检定合格的培养基要转移到无菌湿盒中保存，正面朝上摆放，然后一起放入2～8℃冰箱里保存。

3 大肠杆菌药敏试验

附表 A、B培养基平板药敏试验比较

在禽病门诊采取10户10只大肠杆菌病鸡的肝脏，每份肝脏分别涂抹A、B培养基平板，贴上同样的药敏片，进行37℃培养24h。观察A、B平板大肠杆菌生长情况。观察同类型药敏片在A、B平板上的抑菌效果。

4 结果

4.1 新方法制作的培养基

新方法制作的培养基淡茶色透明，质地均匀，无絮状物或沉淀。药敏试验中培养基平板软硬度适中不易划破。细菌生长方面与传统方法制作的培养基相比较无明显差异。

4.2 大肠杆菌药敏试验结果

两种方法制备的培养基均能让大肠杆菌正常生长，并且不同的药敏片在A、B两种培养基平板上的抑菌效果差别不明显，见附表。

5 讨论

本文通过培养基平板药敏试验检验了培养基制备新方法的可行性，从而证明在普通营养琼脂培养基制备方法可以运用该新方法。培养基制备新方法较传统方法有九处优点，一是缩短了制备时间；二是减少了制备器材 （电炉、石棉网等（；三是有效防止加热溶解过程中的烧焦和外溢事故；四是缩短了高温时间，减少了高温过程对培养基的营养破坏；五是可以批量制备，不像传统方法一次只能加热溶解一个烧杯；六是实现了仪器标准化，不会因人的技能水平差异或者个人行为的偶然性而导致不同批次的培养基质量差异；七是防止水分散失导致浓度变化；八是节省能源；九是防止电炉引起的烫伤甚至火灾。

[1]刘荣华.微生物检测中培养基的制备及注意事项[J].当代临床医刊,2015(1):1236.

[2]马莉.浅谈微生物试验室培养基制备[J].现代测量与试验室管理,2011(3):35-36.