HPLC法同步测定蛹虫草中虫草素及腺苷的含量

李　兵，张文成，王冰嵩，金礼强

（合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009）

·分析测试·

HPLC法同步测定蛹虫草中虫草素及腺苷的含量

李兵，张文成，王冰嵩，金礼强

（合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009）

目的:采用HPLC法同步测定蛹虫草中虫草素及腺苷的含量。方法：采用SGE protecol C18（5μm，250mm×4.6mm）色谱柱，流动相为乙腈-水（5∶95，V/V），检测波长为260nm，流速1.0mL/min，进样量20μL。结果：虫草素和腺苷分别在16.875～540μg/mL、19.375～620μg/mL范围内呈线性相关，相关系数r分别为0.9998、0.9996。该方法重复性、精密度、稳定性及回收率均符合要求。结论：本法用于同步测定蛹虫草中虫草素及腺苷的含量，具有简便、准确和高效等特点。

蛹虫草；虫草素；腺苷；同步检测

蛹虫草[Cordyceps militaris]，又称北虫草、北冬虫夏草，与冬虫夏草同属异种，为麦角菌目麦角菌科虫草属真菌[1]，最初记载于《新华本草纲要》：蛹草“性平，味甘”，具“补精髓，益肺肾，止血化痰”之功效。中医药认为，虫草既能补肺阴亏，又能补肾阳亏，是目前唯一一种能同时平衡和调节阴阳的中药材。虫草素和腺苷是蛹虫草中的两种重要活性成分。虫草素具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、补肾、促进心脑血管循环等药理作用[2-3]；腺苷具有镇静、催眠、抑制癫痫、抗炎、调节免疫的作用[4-5]。

近年来，随着技术的发展以及市场需求的迅速增长，蛹虫草的加工利用已逐步向深层次发展。由于虫草素及腺苷重要的生物活性，蛹虫草已成为医药研究的热点。因此，对蛹虫草中虫草素和腺苷的同步检测及定量分析具有现实意义。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）同步测定蛹虫草中虫草素及腺苷的含量，为蛹虫草的真伪鉴定、产品开发等提供一定的技术支撑。

1　仪器和试剂

高效液相色谱仪（安捷伦，型号1260，美国）；超声波清洗器（型号SC2201）；中药粉碎机（型号FW177）。虫草素对照品、腺苷对照品（中国药品生物制品检定所）；蛹虫草（安徽时代阳光药业）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水（屈臣氏超纯水）。

2　方法与结果

2.1溶液的制备

（1）对照品溶液。分别精密称取虫草素5.4mg，腺苷6.2mg，用90%的甲醇溶剂定容于10mL容量瓶中，分别配制成浓度为540μg/mL、620μg/mL的对照品溶液。

（2）样品溶液。将蛹虫草放入真空干燥箱中，60℃下干燥24h后，用中药粉碎机将蛹虫草粉碎，随后过60目筛，制得粉末样品。精密称取蛹虫草粉末2.0g，置于100mL锥形瓶中，按料液比1∶25添加水，调节pH为7.0，中性蛋白酶添加量为1.0%，于50℃条件下提取150min。放冷后过滤，定容至50mL容量瓶。过0.45μm滤膜，备用。

（3）线性关系考查。分别精密吸取对照品5mL，依次制备系列标准品溶液，进样量为20μL。设定的色谱条件：采用SGE protecol C18（5μm，250mm×4.6mm）色谱柱，流动相为乙腈-水（5∶95，V/V），检测波长为260nm，流速1.0mL/min。按以上条件进行测定，记录主峰面积，以浓度（μg/mL，C）为横坐标，以峰面积值（A）为纵坐标，得线性方程，见表1和表2。

2.2精密度实验

以虫草素及腺苷为研究对象，精密吸取2.1（2）项下的同一样品溶液20μL，连续进样5次，得虫草素及腺苷各次的含量，其RSD分别为1.87%、1.13%。

2.3稳定性实验

以虫草素及腺苷为研究对象，精密吸取2.1（2）项下的同一样品溶液20μL，按设定的色谱条件分别于0、1、2、3、4、5、6、7、8和10h进行进样分析，分别测得每个时间虫草素及腺苷峰的面积，其RSD分别为1.85%、1.48%。

2.4重复性实验

以虫草素及腺苷为研究对象，分别精确称取蛹虫草粉末2.0g5份，按2.1（2）项下的实验方法平行制备供试样液5份，按设定的色谱条件进行分析，进样量为20μL，分别测定各样液中虫草素及腺苷的含量，其RSD值分别为1.52%、1.92%。

表1　虫草素和腺苷的浓度及对应的峰面积

表2　虫草素和腺苷的线性方程（n=6）

2.5加样回收率实验

采用加样回收法，精密称取已知含量的样品5份，分别加入虫草素及腺苷标准品适量，按2.1（2）项下的实验方法制备样品溶液，测定并计算虫草素及腺苷的含量，实验结果见表3。

表3　虫草素及腺苷加样回收率实验

3　结论

实验结果表明，采用HPLC法同步检测蛹虫草中虫草素和腺苷的含量，其精密度、稳定性、重复性和回收率均良好。实验采用SGE protecol C18（5μm，250mm× 4.6mm）色谱柱，流动相为乙腈-水（5∶95，V/V），检测波长为260nm，流速为1.0mL/min，可以达到对虫草素和腺苷很好的分离效果。该方法不仅可以缩短检测时间，而且具有简便、高效和准确的特点。该方法的建立可为蛹虫草的真伪鉴定、产品开发等提供一定的技术支撑。

[1]邵力平.真菌分类学[M].北京：中国林业出版社，1984：109.

[2]刘桂君，周思静，杨素玲，等.蛹虫草中虫草素的研究进展[J].食品科学，2013，34（21）：417-422.

[3]杨杰，陈顺志.虫草素研究进展[J].中国生化药物杂志，2008，29（6）：57-60.

[4]张绪璋.北冬虫夏草的人工培植及其营养成分分析[J].中国实用菌，2002，22（2）：19-21.

[5]袁永生，张莉，许效枫，等.反相高效液相法测定虫草菌粉中核苷类成分的含量[J].中国医学杂志，2002，37（10）：58-60.

Synchronous Determination of Cordycepin and Adenosine in Cordyceps Militaris by HPLC

LI Bing，ZHANG Wen-cheng，WANG Bing-song，JIN Li-qiang
（EngineeringResearch Center ofBio-process fromMinistryofEducation，Hefei UniversityofTechnology，Hefei 230009，China）

Objective：this study has been to establish a method for synchronous determination of cordycepin and adenosine in cordyceps militaris.Method:SGE protecol C18（5μm，250mm×4.6mm）chromatographic column was used，with mixtures of acetonitrile and water as mobile phase（5∶95，V/V），the wavelength was 260mn，the flowrate was 1.0mL/min，the injection volume was 20μL.Results：the linear range of cordycepin and adenosine is 16.875～540μg/mL，19.375～620μg/mL，respectively.The correlation coefficient r is 0.9998，0.9996 respectively.Repeatability，precision，stability and recovery are favorable.Conclusion：the established method is a simple，accurate and efficient for synchronous determination cordycepin and adenosine in cordyceps militaris.

cordyceps militaris；cordycepin；adenosine；synchronization

10.3969/j.issn.1008-553X.2016.04.039

O657.7+2

A

1008-553X（2016）04-0105-03

2016-02-29

李兵（1990-），男，在读研究生，研究方向：天然活性成分，15856921835，15856921835@163.com。