云南山地仿野生抚育姜黄后姜黄素的含量变化研究

张娅+李艳萍+夏海梅

摘要：目的笔者对姜黄仿野生抚育后其姜黄素含量变化及其仿野生抚育后其药材品质进行了相关的追踪研究，研究结果将为今后仿野生种植药材的品质评价和品质保证提供依据。方法用HPLC，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：2%冰醋酸溶液（48：52）为流动相；检测波长为430nm，分别测定姜黄种苗、仿野生抚育一年后子代、二年后子代中姜黄素的含量，并进行对比分析。且对含量较高的姜黄子代药材进行了检查、鉴别、浸出物等检测。结果经过含量测定及对比分析可知，姜黄素含量：两年后子代>姜黄种苗>一年后子代。

关键词：姜黄；姜黄素；仿野生抚育；含量变化

中图分类号：R284文献标志码：B文章编号：1007-2349（2016）09-0081-03

姜黄有多种有效化学成分，在肿瘤、慢性肝病、糖尿病、肾病、皮肤病等疾病的治疗上体现出了优势[1]。姜黄为姜科植物姜黄的干燥根茎，主要产于四川、福建等地，一般为野生，现多为栽培，生用[2]。其性味辛、苦、温，归脾、肝经，有破血行气、通经止痛之功效，被广泛应用于胸胁刺痛、闭经、风湿肩臂疼痛、跌打肿痛等病症[3]。姜黄的生物活性成分包括姜黄酮、姜烯、水芹烯、莪术酮、姜黄素、胭脂树橙、微量元素等。其中姜黄素作为其所含的主要成分，有着多种药理作用和重要的经济前景，近年来被广泛关注[4]。近年来研究表明，姜黄素具有抗肿瘤、护肝、调节免疫功能、抗炎和降血脂等多重药理作用[5]。

目前我国仍有80%左右的中药材来自野生，保证野生中药资源的可持续利用，保证野生药材采集与生态环境保护的协调，实现人与自然的和谐共处，是中医药可持续发展必须解决的关键问题之一[6]。另一方面，如何提高栽培药材质量，使其与野生药材相近，保证生产药材的天然性，也倍受人们关注。药用植物野生抚育具有重要的意义与优势，有效解决了如下矛盾：药材采集与资源更新的矛盾；野生药材供应短缺与需求不断增加的矛盾；药材生产与生态环境保护的矛盾；当前利益与长远利益的矛盾。具有如下优势：①提供高品质的野生药材，野生抚育药用植物在原生环境中生长，人为干预少，不易发生病虫害，远离污染源，产品为近乎天然的野生药材[7]。②能较好保护珍稀濒危药用植物，促进中药资源可持续利用。野生抚育是药用植物资源迁地保护、就地保护及栽培三者的有机结合。通过合适的药材采挖方法，种群自然繁殖或及时补种，实现了抚育药用植物种群的可持续更新，较好地保护了珍稀濒危药用植物及其生物多样性[8]。③有效保护中药资源生长的生态环境，野生抚育模式下药材采挖和生产是在生物群落动态平衡的基础上进行，野生抚育基地药用植物所有权专有化克服了野生药材滥采滥挖对生态环境的严重破坏，实现了药材生产与生态环境保护的协调发展。④有效节约耕地，以低投入获高回报，野生抚育不占用耕地，只在补种和药用植物生长过程中实施最低限度的人为干预，充分利用了药用植物的自然生长特性，大幅降低了人工管理费用。

野生姜黄多分布在落叶混交林及常绿林内。伴生植物有枫香、马桑、山胡椒、石楠、蔷薇和悬钩子等，伴生植物也是姜黄生长发育过程中必不可缺的部分。土壤主要以山地棕壤红黄壤为主，年平均温度为16-18℃。姜黄从发芽到种子成熟一般一年即可完成。其分为：萌芽期、茎叶生长期、花果期以及根状茎生长期等。姜黄被选定为云南省中医药治疗艾滋病试点项目用药复方制剂组成中一味重要的中药材，为了保证中医药治疗艾滋病用药的有效性和安全性，也为了仿野生抚育技术今后能得到大力推广，笔者对野生姜黄的种苗进行了云南山地引种后使其在自然环境下仿野生抚育，对其不同子代中其主要有效成分姜黄素含量变化进行相关研究，其研究结果将为今后仿野生种植药材的品质评价和品质保证提供依据。

1实验材料、仪器

11实验材料姜黄种苗、姜黄一年后子代、姜黄两年后子代：采自云南省西畴县把独村仿野生中药材种植基地。

12实验仪器戴安UltiMate3000高效液相色谱仪（美国戴安公司）；Gemini5uC1811oA46×250 mm色谱柱（美国phenomenex公司）；PhernomexC18保护柱（美国phenomenex公司）；BSA124S-CW电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；CQ250超声清洗仪（上海超声波仪器厂）电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；202-1A（PCD-3000serials）烘箱（上海乔跃电子有限公司）

2实验方法

21水分检查

211姜黄（种苗）水分测定取姜黄供试品26452 g，放入干燥至恒重的扁形称瓶（286237 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷却30 min，精密称定重量（309815 g），再在105℃下干燥1h，冷却，称重（309796 g），至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失重量，计算供试品中含水量（%）。

212姜黄（一年后子代）水分测定取姜黄供试品26525 g，放入干燥至恒重的扁形称瓶（283550 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷却30 min，精密称定重量（307576 g），再在105℃下干燥1 h，冷却，称重（307541 g），至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失重量，计算供试品中含水量（%）。

213姜黄（两年后子代）水分测定取姜黄供试品24456 g，放入干燥至恒重的扁形称瓶（282587 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷却30 min，精密称定重量（305190 g），再在105℃下干燥1 h，冷却，称重（305167 g），至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失重量，计算供试品中含水量（%）。

22灰分检查取干燥至恒重（629666 g）坩埚，称取姜黄两年生子代药材40247 g，放到电炉上加热至无烟，转移至电炉500℃下加热5 h，移至干燥器，干燥30 min，称重。

23酸不溶性灰分的检查向上述装有灰分的坩埚中加入10 mL稀盐酸（95%-105%），水浴加热10 min，加热期间用5mL热水冲洗盖子，洗液并入坩埚中，10 min后用无灰滤纸过滤，水洗滤纸上的残渣至不显氯化物反应为止（用AgNO3试液测试不产生Agcl沉淀为止）。滤渣同滤纸移至坩埚，坩埚移至电炉干燥至恒重。

24浸出物检查取干燥至恒重（839315 g）平底烧瓶，加20318 g姜黄两年生子代药材，加50%稀乙醇50 mL，塞紧称重（1656 g），静置1 h，加热回流，微沸1h，放冷，取下烧瓶，称重（减失量用50%稀乙醇补足），过滤，取滤液25 mL至干燥恒重的蒸发（757330 g），蒸干，放入干燥器30 min，称重为759917 g。

25薄层鉴别取两年生子代姜黄粉末（过一号筛）02 g，加无水乙醇20 mL振摇，放置30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取姜黄素对照品，同法配置，作为对照品溶液。点样：吸取上述溶液各4 μL分别点于同一硅胶G薄层板上。展开剂：以三氯甲烷-甲醇-甲酸（96：4：07）为展开剂。检视条件：分别置于日光下及紫外灯（365 nm）下检视。

26含量测定色谱条件与系统适用性试验 以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：2%冰醋酸溶液（48：52）为流动相；检测波长为430 mn。理论板数按姜黄素峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备 取姜黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每l mL含10 μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取不同姜黄细粉约02 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，称定重量，超声处理20 min，摇匀，离心，精密量取上清液1 mL，置10 mL容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注人液相色谱仪，测定，即得。

3实验结果

34小结

本实验通过对仿野生姜黄种苗、一年后子代、两年后子代进行相关研究（主要包括水分、灰分、水溶性浸出物、薄层鉴别、含量测定）。并采用HPLC法对姜黄野生种苗及其仿野生种植后不同子代药材中有效成分姜黄素进行含量比对分析。比对结果可见，姜黄素含量：两年后子代>姜黄种苗>一年后子代。

研究目的在于通过对引种后仿野生种植的不同年限的子代药材进行采挖，并对其进行有效成分的含量比对，以期得到含量最接近野生药材的第二代药材。该实验数据从中药资源学的角度考虑，为仿野生种植药材的有效性及可推广性提供实验依据。

参考文献：

[1]章村田姜黄药理作用研究进展[J].河南中医，2015，35（5）：1188-1190

[2]高学敏中药学[M].北京：中国中医药出版社，2006：368

[3]韩婷，宓鹤鸣姜黄的化学成分及药理活性研究进展[J].解放军药学学报，2001，17（2）：95-97

[4]汪海慧，成扬姜黄素药理作用的研究进展[J].上海中医药大学学报2007，2（7）：73-76

[5]李琦，金剑，许颖姜黄素的药理作用及其临床应用进展[J].现代中西医结合杂志，2012，21（12）：1366-1368

[6]肖培根，陈士林国家中药资源宏观管理系统的建立[J].中国中药杂志，2003，28（1）：41

[7]陈士林，郭宝林中药资源的可持续利用[J].世界科学技术&中药现代化，2004，6（1）：11

[8]陈士林青藏高原东缘野生中藏药材资源自然保护区的设计与规划[J].中国中药杂志，2000，25（增刊）：281