磁珠吸附法定量检测乙型肝炎病毒的效能

张程 王宇 聂棱 马红



·论 著·

磁珠吸附法定量检测乙型肝炎病毒的效能

张程 王宇 聂棱 马红

目的 建立磁珠吸附定量检测HBV DNA的方法，并评价该方法的检测效率。方法 将病毒载量为107IU/mL的血清样本，倍比稀释成不同浓度的HBV DNA作为血清标准品(理论值)，分别用磁珠吸附定量法(试剂1)、磁珠法(试剂2)、煮沸法(试剂3)3种方法提取HBV DNA，从灵敏度、定量线性关系方面比较本实验方法与国产磁珠法核酸自动提取法和传统煮沸法的提取效果，并对本实验方法进行稳定性验证。结果 灵敏度：HBV DNA定量的检测下限理论值为101IU/mL，试剂1为3.520×101IU/mL，试剂2为9.123×103IU/mL，试剂3为6.195×101IU/mL。相关性：试剂1、试剂2、试剂3提取HBV DNA定量与理论值相关性分析的r值分别为0.986、0.950、0.979(均P<0.01)。稳定性：3种方法检测的相对偏差均值分别为0.243±0.405(试剂1)、1.189±0.855(试剂2)、-0.439±0.618(试剂3)，试剂1对同一样本在不同时间检测结果的相对偏差均值为0.505±0.659。结论 本实验所设计的血清HBV DNA提取方法灵敏，定量线性关系好，结果稳定准确，为定量检测HBV DNA奠定了基础。

HBV DNA；提取；效率

HBV DNA定量检测可用于慢性HBV感染的诊断和治疗适应证的选择，反映病毒复制水平，为抗病毒治疗提供依据及判断其疗效[1]。PCR是一项非常敏感的技术，能检测到10个HBV基因组/mL[2]，但是PCR扩增的效果可能受到提取的HBV DNA载量的影响。因此，随着患者病毒载量的逐渐下降，需要更高效的提取方法。目前，临床上所用的HBV DNA定量检测试剂盒中，进口检测试剂较国产检测试剂更敏感[3]，检测下限为20 IU/mL，线性范围为20～1.7×108IU/mL，但是价格较贵，而普通国产试剂的灵敏度为200～1000 IU/mL，线性范围为1000～1×108IU/mL，其检测效能相对进口试剂较差[4]。本研究采用纳米磁珠吸附的方法定量检测HBV DNA，并与已上市的国产提取试剂盒进行比较，建立敏感、稳定、经济的提取方法。

资料和方法

一、标本来源

HBV DNA阳性及阴性对照血清均来自北京友谊医院肝病中心2015年临床检测样品；……