HBV+自噬小体疫苗治疗HBV急性感染的实验研究

王璐，薛萌，殷鹏飞，樊飞，曹萌，王立新

(东南大学医学院 病原生物学与免疫学系，江苏 南京 210009)



·论 著·

HBV+自噬小体疫苗治疗HBV急性感染的实验研究

王璐，薛萌，殷鹏飞，樊飞，曹萌，王立新

(东南大学医学院 病原生物学与免疫学系，江苏 南京 210009)

目的:探讨转染HBV基因组的HepG2.2.15细胞自噬小体(HBV+DRibbles)诱导HBV特异性免疫应答及其对HBV急性感染的治疗作用。方法：ELISA法检测HBV+DRibbles体外再刺激HBsAg特异性效应细胞产生IFN-γ的水平；对HBV急性感染模型小鼠实施HBV+DRibbles、HBV+DRibbles联合DC免疫，ELISA法检测HBV抗原及抗原肽刺激免疫小鼠淋巴细胞产生IFN-γ的含量；ELISA法、荧光定量PCR法和酶法分别检测小鼠血清HBeAg、HBV DNA、ALT和AST的水平；免疫组织化学法检测小鼠肝组织HBcAg表达及免疫病理损伤。结果：与培养液对照组和HBsAg蛋白刺激组相比，HBV+DRibbles刺激HBsAg特异性效应细胞能够产生更高水平的IFN-γ(P=0.004)；与未负载抗原的DC细胞对照组和负载HBsAg的DC刺激组相比，DC负载HBV+DRibbles再刺激HBsAg特异性CD4+、CD8+T细胞均能产生更高水平的IFN-γ(P<0.001)。与PBS对照组相比，HBV+DRibbles疫苗组和HBV+DRibbles联合DC免疫组均能诱导HBV急性感染模型小鼠产生HBV特异性免疫应答，明显降低血清HBeAg、HBV DNA水平，减低HBcAg+肝细胞比例，而ALT及AST水平未见明显差异，肝组织结构基本正常；但HBV+DRibbles疫苗组与HBV+DRibbles联合DC免疫组之间差异无统计学意义。结论：HBV+DRibbles作为HBV抗原载体，能够有效诱导DC对HBV抗原的交叉递呈；HBV+DRibbles诱导的HBV特异性细胞免疫应答对HBV急性感染具有一定的治疗作用。

乙型肝炎；乙型肝炎病毒；自噬小体；治疗性疫苗；小鼠

乙型肝炎病毒(HBV)感染危及全球人类健康，面对2.4亿HBV慢性感染患者，目前尚无理想的治疗性疫苗[1-2]。我们前期研究[3-5]显示,肿瘤细胞来源自噬小体(DRibbles)是肿瘤抗原的有效载体，能刺激树状突细胞(DC)活化，交叉递呈肿瘤抗原，诱导具有治疗效果的抗肿瘤免疫应答；而转染HBV基因组的HepG2.2.15细胞自噬小体(HBV+DRibbles)中富含HBV抗原成分。本研究旨在进一步探讨HBV+DRibbles能否有效诱导DC交叉递呈HBV抗原，从而诱导HBV特异性细胞应答及其对HBV急性感染的治疗作用，以期为临床HBV感染治疗提供实验依据。……