猪融合抗菌肽基因双质粒共转化重组毕赤酵母菌的构建

陈 骞，万小平，肖永乐，唐健雪，赵世纪，高 荣

（四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室，四川 成都 610064）

猪融合抗菌肽基因双质粒共转化重组毕赤酵母菌的构建

陈 骞，万小平，肖永乐，唐健雪，赵世纪，高 荣*

（四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室，四川 成都 610064）

为构建高效表达的猪融合抗菌肽蛋白的重组酵母菌发酵表达体系，规模化生产制备新型免疫分子防控动物传染病，本试验从实验室先前构建的pGAPZαA-P质粒中克隆出已构建好的猪融合抗菌肽CAMPs基因片段。通过Infusion技术，将CAMPs片段分别克隆入pPIC9K和pPICZαA真核表达质粒中，并通过PCR以及测序验证，成功构建了pPIC9K-CAMPs和pPICZαA-CAMPs重组质粒。通过电转化将线性化pPIC9K-CAMPs转入毕赤酵母GS115基因组中，并筛选高拷贝菌株GS-PK-CAMPs。再将线性化pPICZαA-CAMPs转入重组酵母GS-PK-CAMPs中，筛选出高拷贝菌株GS-PKZ-CAMPs。对重组酵母GS-PKZ-CAMPs进行诱导表达后作转录表达研究，检测抗菌肽是否表达。最终结果显示，成功获得了GS-PKZ-CAMPs可诱导表达菌株，这给猪融合抗菌肽蛋白的大规模发酵制备和应用于动物传染病的防治奠定了可靠的初步基础。

猪抗菌肽；融合基因；共表达；双质粒转化；毕赤酵母

抗菌肽作为宿主防御肽，是机体天然的免疫保护屏障，不但具有良好的抗菌活性，还具有很强的稳定性与安全性[1]，因具有独特的抗菌机制，微生物对其产生耐药性的概率极低[2]。……