重组芋螺毒素His-Xa-MrVIB发酵条件优化

刘云海, 李 钰, 孙芳娇, 高炳淼

1.海南医学院理学院, 海口 571199;2.海南医学院药学院, 海口 571199



重组芋螺毒素His-Xa-MrVIB发酵条件优化

刘云海1, 李 钰1, 孙芳娇1, 高炳淼2*

1.海南医学院理学院, 海口 571199;2.海南医学院药学院, 海口 571199

基因工程法能够简便易行的合成重组芋螺毒素，发酵条件会影响其表达产量。为获得高效表达，采用单因素试验法优化基因工程大肠杆菌的发酵条件如发酵时间、IPTG浓度、初始pH和发酵温度等。利用蛋白定量试剂盒测定表达上清总蛋白量，并用Tricine-SDS-PAGE电泳分离后灰度扫描分析重组芋螺毒素的含量。实验结果获得最佳发酵条件：发酵时间为4 h，IPTG浓度为0.4 mmol/L，培养基初始pH为6.0，发酵温度为26℃，优化后表达量为19.4 mg/L，研究结果为大规模生产芋螺毒素MrVIB奠定了坚实的基础。

芋螺毒素；大肠杆菌；发酵条件；优化

MrVIB属于μO-家族芋螺毒素，于1995年从大理石芋螺(C.marmoreus)中分离纯化获得了MrVIA和MrVIB。其中MrVIB由31个氨基酸组成且含6个半胱氨酸，作用机理为阻断钠离子通道，具有多种药理活性[1～3]。由于6个半胱氨酸和多个疏水氨基酸的存在，人工化学合成MrVIB线性肽后存在氧化折叠形成异构体多、分离难度大、产率低和成本高等问题[4]。近年来，基因工程法能够简便易行的合成大量的芋螺毒素，尤其是对富含半胱氨酸、易成二硫键的多肽具有显著优势[5]。通过融合不同标签的方式将芋螺毒素基因在大肠杆菌中成功表达的研究已有较多文献报道，但通过融合信号肽来引导芋螺毒素在大肠杆菌中分泌表达的报道较少[6～8]。

本研究的前期工作已将分泌表达载体pET22b(+)/His-Xa-MrVIB构建和鉴定好，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中获得分泌表达，但分泌量较低且易形成包涵体[9]。……