基因侧翼序列扩增技术的应用进展

蒲远波郭翠平淑珍

（1. 川北幼儿师范高等专科学校，广元 628017；2. 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081）

基因侧翼序列扩增技术的应用进展

蒲远波1郭翠2平淑珍2

（1. 川北幼儿师范高等专科学校，广元 628017；2. 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081）

扩增基因的侧翼序列在分子生物学研究中具有重要作用。到目前为止，克隆基因侧翼序列的方法主要可以分为3类：反向PCR、外源接头介导PCR、半随机引物PCR。对这些技术的原理以及近期的应用情况进行了较为系统的综述，旨在为研究者选择更可靠、更合理的方法提供依据。

侧翼序列；反向PCR；外源接头介导PCR；半随机引物PCR

侧翼序列是指染色体中特定位点两侧的DNA序列。整合进入转基因作物染色体的外源目的基因插入位点的侧翼序列，对目的基因的正常转录、表达及调控有重要影响，且对研究转基因作物的稳定遗传性以及转基因作物的安全生产具有重要意义，因此，侧翼序列的分析成为植物转基因育种安全评估的重要研究手段，受到广大科学研究者的重视［1，2］。此外，侧翼序列也包括基因的启动子和调控位点，因此对侧翼序列的分析对基因的表达调控研究也有重要作用。目前已经建立了许多关于侧翼序列的分析方法，根据其技术原理，可将这些方法归为3类：反向PCR、外源接头介导PCR、半随机引物PCR。

1 反向PCR（inverse or inverted PCR，I-PCR）

反向PCR方法的重要功能是扩增目标序列的侧翼序列。在进行PCR扩增前，先用合适的限制性内切酶消化基因组，然后让酶切后的片段环化，最后通过扩增引物扩增获得上、下游片段。……