重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定

白羊 章永垒 邹有土 黄奋飞 陈胜亮 阮卡 葛平辉 马燕玲王明灶 陈星

（未名生物医药有限公司，厦门 361009）

重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定

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旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant human β nerve growth factor，rhβNGF），并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增hNGF β亚基基因，将其克隆入pMAL-c2X表达载体，构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达，表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP），Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示，pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确，25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签，SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 kD左右，纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF，结果表明，比活约为1×106U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF，并具有较高的生物学活性。

人神经生长因子；大肠杆菌；可溶表达；生物学活性

神经生长因子（Nerve growth factor，NGF）是最早被发现的神经营养因子，是具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，其对多种细胞特别是中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用［1］。NGF具有重要的临床价值，目前已被广泛用于中枢以及周围神经系统疾病的治疗中，还具有抗病毒、抗炎、调节人免疫系统、促进伤口修复等非神经系统方面的作用［2，3］。NGF包含α、β、γ三个亚基，其中β亚基具有完整的NGF生物学活性，目前临床使用的NGF主要来源于小鼠颌下腺提取的鼠βNGF（mβNGF）［4］。……