小麦过敏原α-醇溶蛋白在大肠杆菌中的表达

毛炜翔，陈红兵

（1. 江西省标准化研究院，南昌 330029；2. 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，南昌 330047）

小麦过敏原α-醇溶蛋白在大肠杆菌中的表达

毛炜翔1，陈红兵2

（1. 江西省标准化研究院，南昌 330029；2. 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，南昌 330047）

小麦中α-醇溶蛋白是乳糜泻的主要致病抗原。本实验根据已报道的α-醇溶蛋白氨基酸序列，PCR法从郑麦9023中扩增出了α-醇溶蛋白基因。分别将α-醇溶蛋白基因克隆到 pMD19-T-Simple载体和pGEX-4T-1载体，经过PCR，酶切，测序鉴定，成功构建了克隆载体pMD19-T-α-gli和表达载体pGEX-4T-1-α-gli，将表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS，借助SDS-PAGE分析方法，成功得到了表达α-醇溶蛋白的大肠杆菌工程菌株。

小麦过敏；醇溶蛋白；分子克隆；表达

随着全球经济一体化和食品贸易国际化，食物过敏问题具有更大的潜在危险性，建立可靠、定量的过敏原检测方法对于确保食品标签的一致性和消费者的安全十分必要[1]。

我国作为小麦生产第一大国，长期以来也是小麦进口大国，年消费量在1亿吨以上[1]，小麦过敏成为一个不可忽视的食品安全问题[2]。然而因历史和研究水平的原因，我国对包括小麦过敏的基础研究投入严重不足，相关的过敏原检测技术和标准还是一片空白。

本实验拟从小麦品种“郑麦9023”（我国当前优质小麦品种种植面积第一位）中，克隆出小麦重要过敏原α-gliadin的基因，并探索α-gliadin的基因在大肠杆菌中的表达。通过本实验，将获得大量重组过敏原α-gliadin，为下一步工作奠定物质基础，如制备单克隆抗体或多克隆抗体、过敏原α-gliadin的表位定位以及乳糜泻病人体外诊断试剂的标准化[1]。……