糖氧剥夺再灌注对PC12细胞自噬、凋亡的影响及意义

陈艾，陈芷，沈兴

(1西南医科大学附属医院，四川泸州646000；2西南医科大学)

糖氧剥夺再灌注对PC12细胞自噬、凋亡的影响及意义

陈艾1，陈芷2，沈兴1

(1西南医科大学附属医院，四川泸州646000；2西南医科大学)

目的 观察糖氧剥夺再灌注对PC12细胞自噬、凋亡的影响，探讨激活自噬调控神经元损伤修复的有效时间窗。方法 将高分化的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞随机分为四组，分别置于缺氧(1% O2、5% CO2、94% N2)环境中培养0 h(OGD 0 h组)、1 h(OGD 1 h组)、2 h(OGD 2 h组)、3 h(OGD 3 h组)；换用含10%灭活胎牛血清的高糖双抗DMEM培养液，正常条件下继续培养，分别培养0、4、8、12 h；采用CCK-8法检测四组各时间点细胞增殖率，采用RT-PCR法检测自噬基因微管相关蛋白2轻链3(LC3-Ⅱ)、凋亡基因Caspase-3相对表达量。结果 OGD 1 h组灌注后各时间点细胞增殖率均高于同时间点OGD 2 h及OGD 3 h组，组间比较P均<0.05；三组再灌注4、8、12 h时细胞增殖率均逐渐降低(P均<0.05)，0、4 h时细胞增殖率比较差异无统计学意义(P均>0.05)。四组再灌注4 h时LC3-Ⅱ相对表达量均低于同组0 h，OGD 1 h、OGD 2 h组再灌注4 h时Caspase-3相对表达量均低于同组0 h，OGD 1 h、 OGD 2 h组再灌注12 h时LC3-Ⅱ、Caspase-3相对表达量均高于同组4、8 h，组间及组内比较P均<0.05。结论 糖氧剥夺再灌注可诱导PC12细胞发生自噬及凋亡，半暗带修复时间窗以糖氧剥夺4 h内为宜。

脑缺血再灌注损伤；糖氧剥夺再灌注；PC12细胞；微管相关蛋白2轻链3；Caspase-3

脑缺血再灌注损伤(CIRI)是儿科常见的病理现象，涉及各年龄段儿童，可继发于新生儿围产期窒息，亦可继发于阿斯综合征、重度脱水、感染等各种原因导致的休克，致残率极高[1]；CIRI发生后有效时间窗内进行半暗带神经元修复是其治疗的重点[2]。有研究认为，轻度缺氧能诱发适度自噬，促使神经元自我清除代谢产物而发挥神经保护作用；缺氧严重则诱导过度自噬，促进神经元加速向凋亡及坏死进展[3]。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞是一类具有交感神经元特性的细胞，能分泌儿茶酚胺类递质[4]；……