miR-133b对骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制作用及其机制

林琰杰，于嘉智，魏传银

(1淄博市第一医院，山东淄博255200；2济南市儿童医院)



miR-133b对骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制作用及其机制

林琰杰1，于嘉智2，魏传银1

(1淄博市第一医院，山东淄博255200；2济南市儿童医院)

目的 探讨miR-133b是否通过下调KLF4抑制骨肉瘤细胞系MG-63的增殖。方法 将MG-63细胞分为对照组、miR-NC组和miR-133bmimic组，对照组不做干预，miR-NC组转染miR-NC,miR-133bmimic组转染miR-133bmimic。24h后，Westernblotting法检测MG-63细胞中与细胞增殖相关的蛋白p21、p27、PCNA、Ki-67以及KLF4的表达，12、24、48h后，MTT法观察细胞增殖活力，利用荧光素酶试验验证KLF4是miR-133b的靶基因；将MG-63细胞随机分为miR-133b组、miR-133b+KLF4组、miR-133b+空质粒组，分别转染miR-133bmimic、miR-133bmimic+KLF4过表达质粒、miR-133bmimic+空质粒。检测MG-63细胞中p21、p27、PCNA、Ki-67、KLF4的表达，并观察细胞增殖情况。结果 相比于miR-NC组，miR-133bmimic组中，24、48hMG-63细胞的增殖活力降低(P均<0.01),PCNA、Ki-67、KLF4的表达减少，p21、p27表达增加(P均<0.05或<0.01)。荧光素酶试验结果显示，miR-133b能够显著降低KLF4-3′-UTR质粒的荧光素活性(P<0.05)；相比于miR-133b+空质粒组，miR-133+KLF4组MG-63细胞中PCNA、Ki-67表达增加(P均<0.05)，p21、p27表达减少(P均<0.01)，细胞增殖率升高(P<0.01)。结论miR-133b通过下调KLF4表达从而抑制骨肉瘤细胞系MG-63的增殖。

骨肉瘤；miRNA-133b；Kruppel样因子4；细胞增殖

微小RNA(miRNA)是一类长度为18～25个核苷酸的非编码小RNA，主要作用于靶基因3′非翻译区(3′ UTR)，通过引起靶基因mRNA的降解或者抑制其翻译，最终调节靶基因的表达[1]。miR-133b已被证实是一种抑癌miRNAs，可调节多种与肿瘤生长、转移、侵袭有关的抑癌基因或蛋白，从而发挥抑制肿瘤进展的作用。但是miR-133b对骨肉瘤细胞增殖的影响尚未有研究报道。2015年2～8月，我们拟通过miR-133b转染骨肉瘤细胞，探索miR-133b对骨肉瘤细胞增殖的作用及其可能的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 人骨肉瘤细胞株MG-63购于上海拜力生物公司；DMEM培养液、胰蛋白酶(Sigma公司)；胎牛血清(GIBCO公司) ；限制性内切酶BamHⅠ、XhoⅠ、T4DNA连接酶；RNA提取试剂(Invitrogen公司)；Takara逆转录试剂盒(大连宝生物公司)；SYBR Green荧光染料试剂盒(Roche公司)；无内毒素质粒小、大提取试剂盒；兔或鼠抗人COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、KLF4、β-actin、GAPDH多克隆抗体(ABCAM公司)；脂质体2000(上海英骏公司)；……