蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控

李 东，汤贝贝，王颖洁，纪艳芹，王 飞，路镇宇，王 曼，张亚妮，李碧春

（扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物繁育与分子设计重点实验室，江苏扬州225009）

蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控

李 东，汤贝贝，王颖洁，纪艳芹，王 飞，路镇宇，王 曼，张亚妮，李碧春

（扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物繁育与分子设计重点实验室，江苏扬州225009）

【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制，为完善鸡胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESC）体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞（primordial germ cells，PGCs）和精原干细胞（spermatogonia stem cell，SSCs），分别提取细胞的总 RNA，采用 RNA-Seq方法对 3种细胞的转录本进行深度测序，然后进行 WEGO（web gene ontology）和KEGG（kyoto encyclopedia of genes and genomes）通路富集分析，筛选出鸡雄性生殖细胞分化过程中参与蛋白质代谢的关键通路及其关键基因，RT-qPCR (Real time Quantitative PCR) 检测部分关键差异基因的表达变化，并与RNA-Seq（RNA sequencing）结果进行比较分析，同时分别从体内和体外水平对关键基因NOS2进行抑制，观察各分组不同天数的细胞形态变化及检测NOS2和C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrin α6和integrin β1等生殖标记基因表达变化情况。【结果】在雄性生殖细胞分化的整个阶段，有697个差异基因参与生物代谢，显著富集于精氨酸-脯氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路以及色氨酸代谢通路，在这3条通路上筛选出NOS2、FAH和IDO等关键性基因，这些基因的在ESCs向SSCs分化过程中表达变化趋势与其在RNA-Seq中的结果一致。体内抑制NOS2基因后，NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrin α6和integrin β1等生殖标记基因在空白组和对照组之间无显著性的差异，而在抑制剂组中，NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrin α6和integrin β1等生殖标记基因的mRNA表达量均出现了降低；……