瘦肉精酶联免疫试剂盒的质量评价与使用

文│匡德春（辽宁省调兵山市畜产品安全检测站）

瘦肉精酶联免疫试剂盒的质量评价与使用

文│匡德春（辽宁省调兵山市畜产品安全检测站）

目前，动物源性食品中瘦肉精的确证检测主要有液相色谱串联质谱法和气相色谱质谱联用法，由于仪器及耗材昂贵，样品提取净化复杂，对检测人员的素质要求较高等原因，确证检测法无法在县区级畜产品检测机构的日常监管和大规模筛查工作中使用。而酶联免疫试剂盒可以经济、快速地实现瘦肉精的筛查工作，在基层单位得以大量使用。

瘦肉精检测中酶联免疫试剂盒的质量评价方法和使用注意事项在实际工作中尤为重要，本文就此进行简述，供广大瘦肉精检测工作者参考与借鉴。

一、质量评价方法

评价瘦肉精酶联免疫试剂盒质量的关键指标有标准曲线、检出限和定量限、准确度和精密度、假阳性率和假阴性率、交叉反应。

1.标准曲线。标准曲线主要确定工作浓度范围和IC50范围。评价定量酶联免疫试剂盒的标准曲线时，按照试剂盒提供的标准曲线浓度（一般不少于5个）进行测试，每个浓度点测量5次，然后拟合标准曲线，并得出50%抑制浓度（IC50）值。IC50是衡量抗体及试剂盒灵敏度的指标，IC50越低说明抗体和试剂盒的灵敏度越高，测定的IC50应低于或等于试剂盒给出的值。

2.检出限和定量限。评价酶联免疫试剂盒的检出限时，应测定20份空白样品的均值，均值加上3倍标准差所得的结果应低于试剂盒给出的检出限。

评价酶联免疫试剂盒的定量限时，按照说明书提供的定量限浓度配制6份样品进行测定验证，定量限的准确度应满足试剂盒的要求。

3.精密度和准确度。评价瘦肉精酶联免疫试剂盒时，应随机选择3个批次的试剂盒，在3个日期进行测试评价。评价时应分别配制定量限、2倍定量限、5被定量限3个浓度的样品，每个浓度配制5个平行样，按试剂盒说明书进行测试，计算精密度和准确度，所得结果应符合试剂盒说明书的要求。

4.假阳性率和假阴性率。对于定性的酶联免疫试剂盒应评价其假阳性率和假阴性率。配制添加检出限浓度的50份样品进行测试，确定假阴性率。制备50份空白样品进行测试，确定假阳性率。一般来说假阳性率可以控制在5%范围内，不得有假阴性存在。

5.交叉反应。根据酶联免疫试剂盒提供的信息，测定试剂盒与待测物、待测物类似物、待测物代谢物等物质的交叉反应率，应满足试剂盒提供的要求。

二、使用注意事项

影响瘦肉精酶联免疫试剂盒检测结果的因素一般有试剂盒选择、检测人员能力、设备状态、环境影响等。

1.试剂盒选择。选择试剂盒时，应考虑拟选试剂盒的检测药物类型是否满足监督筛查的需求，样品前处理方法是否经济、快速、便于现场操作，是否需要增加新的仪器设备，试剂盒的检出限是否满足监督筛查计划的要求。

2.检测人员能力。检测人员能力是影响瘦肉精酶联免疫试剂盒检测结果的主要因素，具体体现在：试剂配制的准确性和规范性，不得使用自来水配制试剂；样品提取、点样、洗板、孵育、显色等操作的熟练程度；酶标仪操作的熟练程度；移液器使用的规范程度等。

3.设备状态。酶标仪、移液器等涉及量值溯源的设备应定期检定/校准，加贴状态标识。需要现场检测时，酶标仪等设备搬运后使用前应进行核查，确保其满足检测的需要。

4.环境影响。环境是影响瘦肉精酶联免疫试剂盒质量及检测结果准确性的关键因素之一。

（1）试剂盒应按要求贮存，一般贮存温度为2～8℃。

（2）标准溶液、显色液对光敏感，实际操作中应避免直接暴露在光线下。

（3）使用前所有试剂应平衡至室温，使用后应迅速将其放回2～8℃。

（4）孵育、显色时应恒温、避光。

5.其他注意事项。不用手或其他物品接触酶标板底部；终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤。

三、小结

尽管酶联免疫试剂盒法检测瘦肉精简便快捷，但影响检测结果准确性的因素较多。除需规范的评价试剂盒本身质量外，在实际操作中应严格按试剂盒说明书规范操作，同时做好质控工作，减少或避免影响因素的干扰，确保检测数据和结果的准确性，为畜产品质量安全监管提供精准的数据支持。