血浆miR-222的表达水平与肺癌的相关性

王宏阳 叶晓明

(浙江大学研究生院，浙江 杭州 310000)

血浆miR-222的表达水平与肺癌的相关性

王宏阳 叶晓明1

(浙江大学研究生院，浙江 杭州 310000)

目的探讨血浆微小RNA(miR)-222与肺癌的相关性。方法选取肺癌患者273例及正常对照201例，抽取晨间空腹抗凝血，并提取血浆总RNA。采用TaqMan探针实时荧光定量PCR法检测各组血浆中miR-222的表达强度。结果肺癌患者血浆miR-222表达水平显著高于正常对照组(P<0.05)。在肺癌患者血浆中，Ⅳ期患者miR-222水平高于Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期患者(P<0.05)。结论miR-222在肺癌患者血浆中表达升高，很可能作为一种新的肺癌标志物用于临床。

微小RNA(miR)222；肺癌；血浆；标志物

肺癌起病隐匿，早期症状不明显，不易被发现，导致患者就诊时往往多已发生转移，失去手术切除机会。然而，由于目前肺癌的早期分子标志物对肺癌的筛查效果并不理想。因此，发现并探索新的血浆肺癌标志物，并在人群中进行筛查，对于提高肺癌早期的检出率和诊断率有重要意义。微小RNA(miR)是细胞内的小分子非编码RNA，它可以通过与其靶基因的3′UTR结合并抑制其表达。miR分子量小，在疾病的发生、发展过程中可透过细胞膜进入血液循环系统，并在一定时间内稳定存在，因此循环血miR很可能是一种新的肿瘤早期标志物应用于临床。miR-222在体内多种组织中广泛存在。目前认为，该miR在包括肺癌在内的多种肿瘤细胞中表达上调〔1～4〕。因此提示，该miR与肿瘤高度相关，并可能在肺癌的发生及发展过程中起到关键性的调控作用。本研究探讨miR-222与肺癌的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 2012年4月至2015年2月于临海市第一人民医院呼吸内科住院、经病理组织学确诊为肺癌的患者273例为肺癌组，男181例，女92例，平均(59.4±7.5)岁。按照国际肺癌分期标准〔5〕，Ⅰ期41例，Ⅱ期53例，Ⅲ期112例，Ⅳ期67例。经病理学分型鳞癌138例，腺癌75例，小细胞癌41例，大细胞癌5例，低分化癌14例。正常对照组201例，随机取自本院体检中心，经体检排除内外科疾病的健康人，男121例，女80例，平均年龄(51.8±5.4)岁。

1.2样品采集与保存 患者在收入院后，在未进行任何治疗前抽取清晨空腹外周静脉血4 ml，并收集于乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝管中之后，立即以1 000 r/min离心10 min。转移上层血浆，并分装于1.5 ml环氧树脂(EP)管中，立即存于-80℃冰箱保存备用。

1.3血浆miR提取及保存 将血浆从冰箱取出，在冰上自然解冻。采用mirVana血浆miR提取试剂盒(Life technologies公司)，按照制造商使用说明加入线虫Cel-miR-39内参，并提取血浆总RNA。用分光光度计检测RNA浓度及提取质量，合格后的标本立即储存于-80℃冰箱保存备用。

1.4血浆miR-222检测 将各RNA样品取出，并用焦碳酸二乙酸(DEPC)水稀释至等浓度，采用ABI公司miR逆转录试剂盒按使用说明分别逆转录各样品中miR-222和内参Cel-miR-39。采用TaqMan探针实时荧光定量PCR法检测各样品中miR-222及Cel-miR-39的Ct值，每个样品设置2个平行孔，并以miR-222与Cel-miR-39的相对Ct值表示miR-222在各样品中的相对表达强度。将正常对照组miR-222的相对表达强度设定为1.00，各组相对于正常对照组血浆miR-222的表达变化。

1.5统计学方法 采用SPSS23.0统计软件进行秩和检验。

2 结 果

正常对照组血清miR-222表达强度为1.00(0.44,1.56)，而肺癌组血浆miR-222表达强度〔2.49(1.27,3.76)〕明显增高(P<0.01)。Ⅳ期肺癌患者血浆miR-222表达水平〔3.16(2.14，4.80)〕较Ⅰ期〔1.38(0.91，2.97)、Ⅱ期1.84(0.80，2.73)及Ⅲ期〔2.70(1.44，4.05)〕患者明显增高(P<0.01)。

3 讨 论

迄今为止，已在人类细胞中发现数百种miR参与调控体内生理及病理过程。miR分子小，性质较为稳定，较多数胞内蛋白更容易释放入血，因此血浆miR水平的改变很可能是某些疾病早期的重要变化。然而，由于检测技术及理论尚不成熟，目前尚无作为疾病标志物的miR在临床上应用。本研究显示肺癌组血浆miR-222水平较正常对照组表达强度升高，由此提示miR-222很可能是一种新的肺癌标志物。

miR-222高表达于肺癌细胞内，且与患者预后呈正相关〔4〕。在肺癌中，miR-222的高表达与高速泳动族蛋白A1有关〔6〕。因此，过表达的miR-222很可能从快速增殖的肺癌细胞中释放入血。本研究中血浆miR-222的表达水平在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中并无明显变化。因此表明，血浆miR-222表达水平与临床分期并不平行，尚不能认为血浆miR-222可作为肺癌临床分期的辅助性依据。但是Ⅳ期患者血浆miR-222表达水平显著高于Ⅰ期及Ⅱ期患者，可能与晚期患者肿瘤组织发生坏死，细胞内容物大量释放有关。

miR-222同时又是一种癌基因，可靶向抑制多种肿瘤抑制蛋白，如p27、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)、金属蛋白酶抑制因子(TIMP)3等〔7～9〕。miR-222可通过抑制上述肿瘤抑制蛋白促进肿瘤增殖、迁移及侵袭等，加速肿瘤的恶化。因此，在治疗的同时采用相应技术干扰miR-222的表达，即可延缓甚至阻断肿瘤的增殖、迁移及侵袭，从而达到延长患者寿命、提高生存质量的目的。因此，miR-222除可作为肺癌的标志物外，还可能是肺癌个体化治疗的潜在靶点。

1Galardi S,Mercatelli N,Giorda E,etal.miR-221 and miR-222 expression affects the proliferation potential of human prostate carcinoma cell lines by targeting p27Kip1〔J〕.J Biol Chem,2007;282(32):23716-24.

2Chen WX,Hu Q,Qiu MT,etal.miR-221/222:promising biomarkers for breast cancer〔J〕.Tumour Biol,2013;34(3):1361-70.

3Wong QW,Ching AK,Chan AW,etal.MiR-222 overexpression confers cell migratory advantages in hepatocellular carcinoma through enhancing AKT signaling〔J〕.Clin Cancer Res,2010;16(3):867-75.

4Mao KP,Zhang WN,Liang XM,etal.MicroRNA-222 expression and its prognostic potential in non-small cell lung cancer〔J〕.Sci World J,2014;2014：908326.

5叶 波，杨龙海，刘向阳.最新国际肺癌TNM分期标准(第7版)修订稿解读〔J〕.中国医刊，2008;43(1):21-3.

6Zhang Y,Ma T,Yang S,etal.High-mobility group A1 proteins enhance the expression of the oncogenic miR-222 in lung cancer cells〔J〕.Mole Cell Biochem,2011;357(1-2):363-71.

7Yang YF,Wang F,Xiao JJ,etal.MiR-222 overexpression promotes proliferation of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells by downregulating p27〔J〕.Int J Clin Exp Med,2014;7(4):893-902.

8Zhou S,Shen D,Wang Y,etal.microRNA-222 targeting PTEN promotes neurite outgrowth from adult dorsal root ganglion neurons following sciatic nerve transection〔J〕.PLoS One,2012;7(9):e44768.

9Lu Y,Roy S,Nuovo G,etal.Anti-microRNA-222(anti-miR-222)and-181B suppress growth of tamoxifen-resistant xenografts in mouse by targeting TIMP3 protein and modulating mitogenic signal〔J〕.J Biol Chem,2011;286(49):42292-302.

〔2016-06-08修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

王宏阳(1984-)，男，在职硕士，主治医师，主要从事呼吸系统疾病研究。

R734.2

A

1005-9202(2017)17-4312-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.068

1 临海市第一人民医院呼吸科