葛根素对免疫抑制模型小鼠细胞免疫功能的影响

高 青 马记平

郑州澍青医学高等专科学校 河南省郑州市 450064

葛根素对免疫抑制模型小鼠细胞免疫功能的影响

高 青 马记平

郑州澍青医学高等专科学校 河南省郑州市 450064

目的：观察葛根素对免疫抑制模型小鼠细胞免疫功能的影响，初步研究其作用机制。方法：通过小鼠体重、脏器指数以及IFN-γ/IL-4比值等，检测葛根素对免疫抑制模型小鼠细胞免疫功能的影响。结果：免疫抑制模型小鼠体重、脏器指数以及IFN-γ/IL-4比值都显著下降。葛根素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠体重、脏器指数以及IFN-γ/IL-4比值都显著升高。结论：葛根素提高小鼠的细胞免疫功能，其机制可能和促进脾脏T淋巴细胞增值，纠正T淋巴细胞亚群Th1/Th2比例紊乱有关。

葛根素；细胞免疫；Th1/Th2近年来，由于环境污染、精神压力等多种因素刺激，免疫紊乱性疾病逐年升高，该类疾病发病机制复杂，迁延难愈。有研究发现[1]葛根素能够增加免疫器官的重量，

对T淋巴细胞的增值分化有一定的促进作用，葛根素在治疗免疫紊乱疾病上有独特的优势，引起广泛的重视。本研究用环磷酰胺诱导免疫抑制模型小鼠[2]，在造模的基础上给予不同浓度的葛根素片，研究葛根素对免疫抑制模型小鼠细胞免疫功能的影响，并初步研究其可能的作用机制。

1 实验的材料

1.1 试剂与仪器

RPMI1640细胞培养液（焦作路非凡生物科技有限公司，批号30021）；四甲基偶氮唑盐（MTT，新乡智宝生物科技有限公司，批号：M2126）；葛根素片（郑州荔诺生物科技有限公司，批号：120523）；小鼠IL-4、IFN-γ的ELISA检测试剂盒（郑州唯尔生物科技）。

1.2 动物与分组

KM种雄性小鼠（18～22g）120只，由山东鲁抗医药股份有限公司提供，生产许可证号SCXK（鲁）2013-0001。将动物置于清洁级动物房内，自由摄食1周后实验。按随机区组分组法将小鼠分组，每组10只。试验前3d，正常组腹腔注射0.1mL/10g的生理盐水，其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，连续三天造免疫抑制模型[3]。试验第4d起，正常组灌胃生理盐水，阳性对照组灌胃香菇多糖（100mg/ kg），葛根素各组分别灌胃50、150、300mg/kg的葛根素溶液，各组0.1mL/10g BW连续灌胃给药2周。

2 方法

2.1 葛根素对小鼠体重、脏器指数的影响

摘取小鼠的胸腺和脾脏，称重记录，按照下列公式计算脏器指数。脾脏指数=（脾脏重量mg/小鼠体重g）×10；胸腺指数=（胸腺重量mg/小鼠体重g）×10

2.2 血清中IFN-γ、IL-4的含量测定

没有加抗凝剂的血液，在室温放置2h后3500r•min-1离心10min，取上清，即得血清。按照ELISA试剂盒说明书操作步骤进行操作，最后酶标仪在450nm下读取吸光度。

3 数据处理

本实验采用SPSS17.0版的统计软件进行了方差分析，实验结果用表示，实验的组间比较使用单因素方差分析，实验结果以P<0.05表示差异有统计学的意义。

4 结果

4.1 葛根素对小鼠体重、脏器指数的影响

根据最后一次各组小鼠体重相比发现，模型组小鼠体重、脾脏指数和胸腺指数显著低于正常组（P<0.01或P<0.05），葛根素组小鼠体重、脾脏指数和胸腺指数显著高于模型组小鼠（P<0.01或P<0.05）。见表1。

表1：葛根素对各组小鼠脏器指数、体重的影响（n=10）

表1：葛根素对各组小鼠脏器指数、体重的影响（n=10）

注：与正常组相比▲▲P<0.01，▲P<0.05；与模型组相比★P<0.05，★★P<0.01

组别体重（g）脾脏指数胸腺指数正常组32.14±0.6548.84±9.4320.35±4.29模型组27.35±0.64▲32.68±8.07▲▲10.72±1.82▲▲阳性药组32.25±0.56★53.41±10.28★★20.28±5.46★葛根素Ⅰ组29.50±1.4346.87±12.63★16.28±5.46葛根素Ⅱ组30.58±0.81★50.88±12.04★★18.65±5.06★葛根素Ⅲ组31.73±0.49★★47.25±11.69★20.59±6.17★

4.2 葛根素对小鼠血清中IFN-r和IL-4含量的影响

模型组和正常组相比，血清中IFN-r含量显著降低（P<0.01），IL-4的含量升高（P<0.05），IFN-r/IL-4比值显著升高（P<0.01），葛根素组小鼠与模型组小鼠相比，血清中IFN-r含量显著升高（P<0.01，P<0.05），IL-4的含量明显升高（P<0.05），IFN-r/IL-4比值显著升高（P<0.01，P<0.05）。见表2。

表2：葛根素对血清中IL-4和IFN-r含量的影响

5 讨论

脾脏、胸腺是重要的免疫器官，其重量及功能在一定程度上影响机体的免疫功能，其中脾脏淋巴细胞增殖能力是机体细胞免疫能力的主要指标之一[5]。T淋巴细胞是相当复杂的不均一体，在体内不同细胞因子刺激下可分化为Th2型、Th1型细胞。Th1型细胞分泌IFN-γ、IL-2[6]等，主要介导了细胞免疫应答。但是Th2型细胞主要分泌IL-4、IL-5等，主要介导体液免疫应答，辅助抗体生成[7]。正常情况下，Th1/Th2处于一种相对稳定的状态，维持机体免疫稳态，但是当机体免疫抑制等症状时，出现Th1/Th2比例的失衡。实验发现葛根素能够上调血清中IFN-γ含量，降低血清中IL-4含量，升高IFN-γ/IL-4比值，改善Th1/Th2比例，进而影响小鼠的细胞免疫功能。葛根素可能通过促进脾脏T淋巴细胞增值，刺激Th1型细胞分化增生，纠正T淋巴细胞亚群Th1/Th2细胞比例紊乱，提高免疫抑制小鼠的免疫功能。

[1]程丽彩.葛根素对机体免疫系统影响研究进展[J].实用中医药杂志,2010,26(06):440-441.

[2]包汇慧,耿雪,贾旭东,等.环磷酰胺对大鼠脾细胞抑制作用的研究[J].毒理学杂志,2014,28(03):189-194.

[3]陈健明,陈殿慧,余秀雪,等.玉屏风药液对环磷酰胺抑制的C57BL/6小鼠免疫功能的影响[J].现代中西医结合杂志,2014,23(23):2509-2612.

[4]曾光,梁清华,吴汉军,等.熊果酸对刀豆蛋白A诱导小鼠T细胞增殖与激活的影响[J].湖南中医药大学学报,2008(02):16-18.

[5]于晓红,李书丹,阚洪敏,等.红树莓原液对免疫抑制小鼠脏器指数及血清IFN-γ、IL-4水平的影响[J].天津中医药,2015,32(03):173-175.

[6]翟志敏.IL-2对免疫激活和免疫耐受的双向调节作用[J].中国药理学通报,2013(03):319-322.

[7]李春光,王月飞,赵红晔,等.化湿汤结合润肤止痒膏对湿疹小鼠血清IL-4和IFN-γ水平影响[J].中国中医药科技,2015,22(01):31-32.

高青（1987-），女，河南省郑州市经济技术开发区人。硕士学位。现为郑州澍青医学高等专科学校助教，从事药理学教学工作。