青稞酒中糖精钠含量的测定方法研究

蔡林森

(青海省产品质量监督检验所，青海西宁810001)

青稞酒中糖精钠含量的测定方法研究

蔡林森

(青海省产品质量监督检验所，青海西宁810001)

建立了高效液相色谱法测定青稞酒中糖精钠的检测方法。将青稞酒样品10.0 g在平行蒸发仪上减压蒸发至近干再用超纯水定容至10 mL，待分析。采用Inertsustain C18（4.6×250 mm×5 μm）柱分离。以0.02 mol/L的乙酸铵缓冲液和甲醇（V∶V=85∶15）为流动相，流速0.8 mL/min，柱温40℃，进样量为10 μL，紫外检测器的波长为220 nm。实验结果表明，糖精钠在5～150 μg/mL范围内线性良好，线性方程为：y=24893.5x，相关系数R2=0.9999。加标回收率为97.74%～106.9%，检出限为0.023 μg/mL。本方法简便、快速、精密、准确，可用于青稞酒中糖精钠的检测。

糖精钠；青稞酒；高效液相色谱

青稞酒是青藏高原特有的民族传统产品，是以青稞和豌豆为主要原料，用大曲、小曲及酒母等作为糖化发酵剂，经过一系列的化学反应而制成的。由于在酿制过程中可能会产生苦涩的味道，为了改善其口感，生产企业通常会非法添加一些甜味剂，如甜蜜素、安赛蜜、糖精钠等。我国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中明确规定，蒸馏酒中不得添加人工合成甜味剂，在配制酒中可以添加少量，对添加量也作出了严格的规定[1-2]。因此，建立一种简单、快速、准确的方法来测定青稞酒中糖精钠的含量是非常必要的。常用糖精钠的检测方法为液相色谱法[3-4]，超高效液相色谱-质谱法[5-7]。但由于青稞酒中的基质复杂，而且只需加入少量的甜味剂就能改变其口味，同时仪器检出限等方面存在的问题，给青稞酒中糖精钠的检测工作带来了较大的困难。本实验采用高效液相色谱对青稞酒中糖精钠进行检测，该方法不需对样品进行复杂的前处理，而且定量准确，稳定性好，灵敏度高，检测成本低，为青稞酒中甜味剂的检测提供了依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

样品：青稞酒（购于青海青稞酒生产企业）。

试剂及耗材：糖精钠（LA16901010，纯度99.9%，Dr Ehrenstorfer GmbH），甲醇（色谱纯，Fisher scientific），乙酸铵（分析纯，烟台市双双化工有限公司），0.22 μm滤膜（上海密柱膜分离技术有限公司）。

仪器设备：高效液相色谱仪（岛津LC-20A，岛津企业管理中国有限公司），超纯水机（GWA-UN4-20，普析通用）；平行蒸发仪（BUCHI Synlore）。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsustain C18（4.6×250 mm×5 μm）；流动相：0.02 mol/L乙酸铵∶甲醇（V∶V=85∶15）；流速0.8 mL/min；柱温40℃；进样量为10 μL；紫外检测器的波长为220 nm。

1.2.2 标准工作曲线的配制

准确称取糖精钠固体标准品0.0500 g，用纯水溶解后定容至50 mL的容量瓶中，即配得1000 μg/mL的标准储备液，待用。

分别吸取50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、800 μL、1000 μL、1500 μL用纯水定容至10 mL容量瓶中，即配得5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL的标准工作曲线。

1.2.3 样品前处理

称取青稞酒样品10.0 g于平行蒸发管中，在减压的条件下蒸发至近干以除去乙醇，再用超纯水定容至10 mL混合均匀，过0.22 μm微孔滤膜，待上机测试。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线范围的选择

根据《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定的最大使用限量150 mg/kg和样品前处理的方法，本实验选择了5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL为线性范围，每个标准浓度点重复进样3次，取其平均值。同时考察了标准浓度点与标准偏差的关系，其比值为一常数，选取了直线回归方程。得到的线性方程为：y=24893.5x，相关系数R2= 0.9999。

2.2 标准曲线的校准验证

根据实验室质量控制的要求，需要对标准曲线的准确性进行验证。本实验通过另取不同批次的糖精钠标准品，分别配制成浓度为10 μg/mL、80 μg/mL、150 μg/mL的标准溶液，在相同的实验条件下重复测定3次，取其平均值。偏差分别为2.0%、0.4%、0.3%。符合实验室质量控制的要求。测定结果见表1。

2.3 流动相的选择

通过比较水-甲醇、水-乙腈、乙酸铵-甲醇和乙酸铵-乙腈对峰形和灵敏度的影响，其中乙酸铵-甲醇明显优于其他3种体系的流动相，通过多次实验优化，本实验最终选取了0.02 mol/L的乙酸铵∶甲醇（V∶V=85∶15）作为流动相。

2.4 样品前处理

青稞酒中含有大量的乙醇，对糖精钠的检测有严重的干扰。由于糖精钠属于盐类化合物，其熔点高且难挥发，通过蒸发除去乙醇。本实验通过比较了水浴加热蒸发、旋转蒸发和平行蒸发的效率，平行蒸发能同时处理12个样品，且蒸干的时间短，因此选取了平行蒸发。本实验采用平行蒸发仪将10.0 g的青稞酒蒸至近干，然后用纯水定容至10 mL，上机测试。该方法既能避免青稞酒中其他成分对检测的干扰，又能保证较高的回收率。

2.5 方法的准确度及精密度

在空白青稞酒样品中分别加入10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 3个水平浓度的糖精钠标品，按实验相同的样品前处理方法，在相同的仪器条件下重复测定6次，计算回收率和精密度。其结果见表2。

由表2可知，糖精钠在10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 3个浓度水平的精密度实验中相对标准偏差（RSD）在0.058%～0.23%之间，表明精密度良好；回收率在97.74%～106.9%，表明准确度高。

2.6 方法的检出限

方法检出限是指给定的方法在特定的条件下能够检出被测物质的最小浓度值，它是表示分析方法的重要的参数之一。分析方法的检出限与仪器噪音，样品的性质，前处理方法，试剂等都有直接的关系。为了能够准确的反映整个分析方法在分析过程中的误差，可采用标准物质按方法的分析步骤进行检测，本实验通过分析12份已知的标品计算方法的检出限。计算公式如下：CL=KSC/X，其中：CL为方法的检出限，μg/mL；K为置信因子，一般取3；S为样品测量值的标准偏差；C为样品含量值，μg/mL；X为样品测量值的平均数。本实验取12份0.5 μg/mL的糖精钠标准品，按照测定方法进行测定，测定结果见表3。按公式计算检出限为：0.023 μg/mL。

2.7 不确定度分析

根据《检测和校准实验室能力的通用要求》的规定，

当检测的结果在标准要求的临界值上下时，有可能导致误判产品不合格时，应该计算该方法的不确定度，以确保检测数据的有效性和准确性。本实验不确定度的主要来源有电子天平、容量瓶、标准物质的不确定度等因素。由于本实验检测的样品中均不含糖精钠，不存在误判的可能，就未采用不确定度来校正结果。在以后的检测中，当出现检测结果在临界值上下时，必须用不确定度来校正结果。

2.8 样品分析

抽取了青海省20家青稞酒厂的40个青稞酒样品，用该方法进行检测，均未检出糖精钠。

3 结论

本实验通过优化色谱条件和前处理方法，建立了一种高效液相色谱法检测青稞酒中糖精钠的方法，对不同青稞酒厂家的生产的青稞酒进行检测，均未检出糖精钠。实验结果表明：该方法稳定性好，准确度高，重复性好，用于青稞酒中糖精钠的检测，前处理简单，是一种实用性较强的检测方法。

[1]鲁琳,杭义萍,高燕红,等.食品甜味剂分类及其检测技术现状[J].现代预防医学,2009,36(11)：2033-2035.

[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准食品添加剂使用标准：GB 2760—2014[S].北京：中国标准出版社,2014.

[3]程春梅,赵燕,师邱毅,等.液相色谱法测定白酒中安赛蜜和糖精钠含量[J].酿酒科技,2012(6)：99-101.

[4]陈仁远,冯永渝,梁桂娟,等.白酒中甜味剂含量的本底值及来源研究[J].酿酒科技,2014(9)：37-41.

[5]胡强,王延云,李超豪,等.超高效液相色谱质谱法快速测定白酒中痕量甜味剂[J].食品科学,2013,34：232-236.

[6]柯润辉,王丽娟,安红梅,等.超高效液相色谱-串联质谱法直接测定白酒中8种甜味剂[J].酿酒科技,2016(5)：107-110.

[7]刘佟,杨悠悠,王浩,等.超高效液相色谱-串联质谱法测定饮品中7种人工合成甜味剂[J].分析测试技术与仪器,2015,12(21)：218-224.

Determination of Saccharin Sodium Content in Highland Barley Liquor

CAI Linsen
(Qinghai Product Quality Supervision and Inspection Institute,Xining,Qinghai 810001,China)

The determination method of saccharin sodium content in highland barley liquor by HPLC had been developed.10.0 g liquor sample was placed on multivapor for decompression-evaporation until almost dry,then ultra-pure water was injected to 10 mL for subsequent analysis. Inertsustain C18(4.6×250 mm×5 μm)column was used for separation.0.02 mol/L ammonium acetate buffer and methanol(V/V=85∶15) was used as mobile phase,the flowing rate was 0.8 mL/min,the column temperature was at 40℃,the injection volume was 10 μL,and the wavelength of ultraviolet detector was at 220 nm.The experimental results showed that sodium saccharin showed a good linear relationship within 5 to 150 μg/mL and the linear equation was y=24893.5x,the correlation coefficient R2=0.9999,the recovery was between 97.74%to 106.9%,and the detection limit was 0.023 μg/mL.This method was simple,rapid,precise,accurate and it could be used in the analysis of saccharin sodium in highland barley liquor.

saccharin sodium;highland barley liquor;liquid chromatography

TS262.3；TS261.7

A

1001-9286（2017）03-0107-02

10.13746/j.njkj.2016358

2016-12-02

蔡林森（1986-），男，重庆开县人，硕士研究生，助理研究员，研究方向为材料化学和食品分析。

优先数字出版时间：2017-01-25；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170125.0744.002.html。