饮料中柠檬黄含量测定方法的优化

□ 余方林 恒枫食品科技有限公司 包秀秀 杭州市食品药品检验研究院 严大迅 宏胜饮料集团有限公司

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪，配紫外检测器。

试剂：柠檬黄标准品（GBW(E)100001a）、乙酸铵（HPLC）、甲醇（HPLC）、冰醋酸（HPLC）、无水乙醇（HPLC）、甲酸（AR）、柠檬酸（AR）、氨水（AR），超纯水。

1.2 实验步骤

1.2.1 标准溶液配制和样品前处理

准确移取0.500 mg/mL的柠檬黄标准溶液用超纯水逐级稀释至1.0～50.0 μg/mL系列标准溶液，经0.45μm滤膜过滤后上机。

称取适量饮料样品至100mL烧杯内，加柠檬酸溶液调pH至3～4，60℃水浴10min。将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品中，搅拌并水浴10 min，以沙芯漏斗过滤，用60℃ pH为3～4的水洗涤3～5次，用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至10 mL，经0.45μm微孔滤膜过滤后分析。

1.2.2 液相色谱条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150mm，5µm）。

流动相：A：0.02mol/LNH4AC，B：甲醇。（0-3 min：从95%A到65%A；3-7 min： 从 65%A到 0%A；7-10 min： 从0%A到 0%A；10-10.1 min： 从 0%A到95%A；10.1-21 min：维持95%A）。

流速 1.0mL/min； 进 样 量 10µL；柱温35℃；检测器1260DAD VL+ 检测器；检测波长254 nm、428 nm。

2 结果与讨论

2.1 不同检测波长比对

柠檬黄在254 nm和428 nm波长下均有最大吸收峰，因此考察了254 nm和428 nm波长下对检测结果的影响。结果表明，254 nm波长下的样品谱图杂峰较多，428 nm波长下的样品谱图峰干净，杂峰少。另外，直接进样在254 nm波长下的结果高于在428 nm时的结果，而用聚酰胺处理后的样品在254 nm和428 nm时的结果基本一致，说明直接进样的样品在254 nm处有杂质吸收，对柠檬黄的检测结果造成干扰，使结果偏高。因此，选择428 nm为检测波长。

2.2 pH值对聚酰胺吸附的影响

选择pH为3.75的饮料样品，考察了pH对聚酰胺吸附效果的影响，结果表明，将样品溶液pH调至6后，样品柠檬黄加标回收率为65.0%，而不调pH的样品柠檬黄的加标回收率高达92.8%，说明在pH为6的溶液环境下聚酰胺吸附柠檬黄的能力变弱。……