三重荧光定量PCR检测水产动物源细菌磺胺类耐药基因

黄国秋，童桂香，韦信贤，陈静，吴明媛，黎小正

(广西水产科学研究院，广西 南宁 530021)

三重荧光定量PCR检测水产动物源细菌磺胺类耐药基因

黄国秋，童桂香，韦信贤，陈静，吴明媛，黎小正*

(广西水产科学研究院，广西 南宁 530021)

根据GenBank中细菌磺胺类耐药基因Sul1、Sul2和Sul3的保守序列设计3对特异性引物及相应TaqMan探针，以重组质粒标准品为模板对反应条件进行优化，建立一种可同时检测上述3种耐药基因的三重荧光定量PCR方法，并对该方法进行敏感性、特异性、重复性及临床菌株检测试验。结果表明：该方法定量范围为1×101～1×108拷贝/反应时，其标准曲线呈良好的线性关系；该方法灵敏度高(3个基因的最低质粒检测限均可达到10拷贝/反应)、特异性强(与其他病原菌及病毒无交叉反应)、重复性好(变异系数均小于2%)；对临床菌株的检测结果与药敏试验结果的符合率达94.2%，且整个检测过程可在2 h内完成。所建立的可同时检测Sul1、Sul2和Sul3基因的三重荧光定量PCR方法可用于临床检测细菌的磺胺类耐药基因。

水产动物源细菌；磺胺类耐药基因；三重荧光定量PCR

细菌性疾病是中国水产养殖动物的主要病害，其造成水产养殖动物的损失占全部病害损失的50%以上[1–2]。在水产养殖过程中，使用各种抗菌素类药物抑制或者杀灭致病菌是防治水产养殖动物细菌性疾病最有效的手段。磺胺类药物作为主要的渔用抗菌药具有抗菌谱广、药效显著、价格低、易储存等优点，是目前各水产养殖场的必备药物。国内大量研究结果表明，水产动物源细菌对磺胺类药物已经产生了广泛的耐药性[3–5]。……